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人转铁蛋白(TF)shi剂盒

如果您对该荣yi登lu感兴qu的话,可以
荣yi登lu名称: 人转铁蛋白(TF)shi剂盒
荣yi登lu型号: TF
荣yi登lu展shang: ELISAshi剂盒
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简dan介绍

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人转铁蛋白(TF)shi剂盒  的详细介绍


转铁蛋白(TF)shi剂盒

使用说明书

转铁蛋白(TF)shi剂盒基ben原理:

benshi剂盒采用双荣yi登lujia心ELISA法。用抗人TF荣yi登lu包被yu酶标板上,实验时样pin或标准pin中的人TF与包被荣yi登lu结合,游离的成分被洗去。依次jia入生物suhua的抗人TF荣yi登lu和辣根过yanghua物酶标ji的亲和su。抗人TF荣yi登lu与结合在包被荣yi登lu上的人TF结合、生物su与亲和sute异xing结合而xing成**复合物,游离的成分被洗去。jia入显色底物(TMB),TMB在辣根过yanghua物酶的催huaxia呈现lan色,jia终止液后变成黄色。用酶标yi在450nm波长chu测ODzhi,人TF浓度与OD450zhi之间呈正比,通过绘制标准qu线计算出样pin中人TF的浓度

转铁蛋白(TF)shi剂盒描shu:

英文名称 Human TF (Transferrin) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 人转铁蛋白(TF)酶联**xi附测定shi剂盒
货号 X-EL-H0171c zhong属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双荣yi登lujia心法
检测范围 1.563~100ng/mL 灵敏度 0.938ng/mL

shi剂盒组成:

謝ing拿劈/span>

英文名称

规格

bao存

  ELISA酶标板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准pin

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准pin&样pin稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物suhua荣yi登lu

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物suhua荣yi登lu稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣yi登lu说明书

Product  Description

  1 fen

 

质检报gao

Certificate of Analysis

  1 fen

 

tebie说明
*: [96T/48T](打kai包装后请ji时检查suo觴ing飌in是否齐全wan整)
#: yi周内使用可存yu4℃,需长时间存fang或多次使用建yi存yu-20.                                      

转铁蛋白(TF)shi剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20穤hong哟颖渲腥〕鰏hi剂簒iao胶鈠hi室温。

2. 将浓缩洗祔ou河盟魋hui稀释(1:25)。wei用wan的fang回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗祔ou嚎赡苡薪峋В魕u正常现象,可用40℃shui浴weijiare使结晶wan全溶解后zai配制洗祔ou海╦iare温度不要chao过50℃,使用时洗祔ou簓ing为室温)。dang日使用。

3. 标准pinyu10000×g离心1穤hong樱琷ia入标准pin&样pin稀释液1.0mLzhi冻干标准pin謝iao鬵uan盖,静置10穤hong樱蟲ia颠倒数次,待qi充分溶解后,用移液器将qi轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根ju需要进行倍比稀释(注:不要直接在反ying孔中进行倍比稀释)。建yi配制成以xia浓度:按zhao稀释方法tu例 标准pin&样pin稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准pin:取0.5mL10ng/mL的上shu标准pinjia入含有0.5mL标准pin&样pin稀释液的EPguan謝iao煸燃纯桑琿iyu浓度依此类推。 

4. 生物suhua荣yi登lu工作液:实验前计算dang次实验suo需用量(以100μL/孔计),实际配制时ying多配制100-200μL。使用前15穤hong樱陨飐uhua荣yi登lu稀释液稀释浓缩生物suhua荣yi登lu(1:100)成工作浓度。dang日使用。

5. 酶结合物工作液:实验前计算dang次实验suo需用量(以100μL/孔计),实际配制时ying多配制100-200μL。使用前15穤hong樱悦附岷衔锵∈鸵合∈团ㄋ酎/span>HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

dang日使用。

转铁蛋白(TF)shi剂盒标准pin稀释方法tu例:(以500μL/guan为例,也可根ju实际用量来稀释,如200μL/guan)

            

1. 在各孔中jia入标准pin或样pin各100μL 37℃孵育90穤hong尹/span>

2. jia入100μ生物suhua荣yi登lu工作液,37℃孵育60穤hong尹/span>

3. 洗涤3

4. jia入100μL酶结合物工作液, 37℃孵育30穤hong尹/span>

5. 洗涤5

6. jia入90μL底物溶液, 37℃孵育15穤hong幼髖ou

7. jia入50μL终止液,li即在450nm波长chu测量ODzhi

8. 结果计算

yi、操作yinsu对ELISA结果的影响ELISA操作步zhou复杂,操作不dang将引起jiaoda的误差。以xiaxushu各个步zhou中的影响yinsu。

1.jia样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、粂i纳柚猛ǔG榭鰔ia,ELISA定xing实验以“阳xing”和“阴xing”来报gao结果,两zhe间有yitiao分界线被称为“阳xing判断zhiao?/span>cut-off valueCOzhi),这是定xing**测定结果报gao的依ju。

三、标ben复查ELISAshou工检测过程复杂,影响yinsujiao多,即使室内质控在控,也可能yin孔间差异而造成结果的差异,yin此jiada复查力度是baozheng结果准确xing的可kao方法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等xiang目的可yi、弱阳xing标benji少见mo式的检测结果进行复查。

si、结果判断和报gao常用xialie几zhong方法表示结果:

1.定xing测定

2.半定量测定 结果yiban以滴度表蔶inⅫ/span>

3.定量测定 即用已知量的标准pin作yi系lie稀释后进行ELISA测定,绘制标准qu线,结果以优良量或dan位表蔶inT冱/span>ELISA定羕ao觳庵忻縴i块反ying板都必须绘制相ying的标准qu线。

注意事xiang:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检查shi剂盒标签上的有效期。如果chao过有效期,请勿使用。

按说明书确定suo有shi剂齐全(数量、ti积)。

标ben制备要规范,每fen标benti积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),jin量分装做备fen。短期内wu法实验zhe,注意低温bao存。

准备好suo有实验额waisuo需物pin,(眗e缫埔浩鳎瑂higuan,清洗器,酶标yi)。

按说明书将suo用shi剂平衡zhi室温,根ju检测标ben数量确定suo需shi剂的量。

检查shi剂盒内每zhongshi剂的贮存tiaojian,baozhengsuo有shi剂均按zhaoshi剂盒内说明书推荐的tiaojian存储。

检查不稳定或zhe变质的shi剂溶液(眗e绯羋ian或变色)。有些shi剂,眗e绫曜紁in稀释液或zhe检测稀释液,可能在设计蔮en秃谐羋ian物。suo有shi剂在滴入酶标板之前,必需充分混匀。而由yu沉dian物的texing,在jia入酶标板之前,必需不停搅拌。

baozheng充穤hi姆跤奔浜臀露取Ⅻ/span>

莤ing鹗褂貌籺ong生产批号的shi剂取代现有shi剂或混合现有shi剂。

在混合或溶解蛋白溶液蔮ao苊馀菽Ⅻ/span>

在实验kai始之前,an排好实验流程。

在实验kai始之前,清jie工作台。

若觴ing侍猓瑈ing与wo公司或代理shang的ji术支硓hi袋/span>

转铁蛋白(TF)shi剂盒结果判断:

1. 每个标准pin的ODzhi减去空白孔的ODzhi后作tu,如设置复孔,则ying取qi平均zhi计算。襶uan曜紁in的浓度为横zuo标,ODzhi为zongzuo标,绘出标准qu线。亦可以ODzhi为横zuo标,标准pin的浓度为zongzuo标,绘出标准qu线。

2. 推荐使用专业的qu线制作软jian,如curve expert 1.31.4,在软jian界面既可根ju样pinODzhi,由标准qu线查出相ying的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样pin的ODzhi代入标准qu线的拟合方程式,计算出样pin浓度,zai乘以稀释倍数,即为样pin的实际浓度。

3. 若样pinODzhigaoyu标准qu线上限,ying适dang稀释后重测,计算浓度时ying乘以稀释倍数。 

转铁蛋白(TF)shi剂盒有效期稳定xingkao察

benshi验以转铁蛋白(TF)为例

1.  ODzhi:

正常bao存tiaojianxia有效期内和chao过有效期2个月suo测OD謉ang萰iao

正常有效期内ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chao过2个月有效期ODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分bieyu定zhixue清jixuejiang中jia入yi定量的转铁蛋白(TF)标准pin,重复测定并计算qipin均zhi,回收率为测定zhi与理lunzhi的比率。

        正常bao存tiaojianxia有效期内和过有效期2个月elisa shi剂盒回收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线xing:分bieyu定zhixue清jixuejiang中jia入yi定量的转铁蛋白(TF)标准pin,并将标ben按1:2,1:4,1:8稀释,线xing范围即为稀释后样ben中转铁蛋白(TF)含量的测定zhi与理lunzhi的比率。

         正常bao存tiaojianxia有效期内和过有效期2个月elisa shi剂盒回线xing检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样pin测定zhi的变异系数CV表蔶inⅫ/span>CV%=SD/meanx100

批内差:取tongyi批次shi剂盒对低zhi,中zhi和gaozhi样ben进行定羕ao觳猓縡en样ben测定20次,分bie计算不tong浓度样ben的平均zhi和SDzhi。

批间差:选取 3 个不tong批次的shi剂盒分bie对低、中、gaozhi定zhi样ben进行定量测定, 每个样ben使用tongyishi剂盒重复测定 8 次,分bie计算不tong浓度样ben的平均zhiji SD zhi。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常bao存tiaojianxia有效期内和过有效期2个月elisa shi剂盒回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

转铁蛋白(TF)shi剂盒会出蟴hi奈侍鈐i解决办法:

1. jia入反ying终止液后,没有xi光zhi或xi光zhi偏低。

a.原yin:weijia入酶标ji物。

解决办法:请按zhao操作步zhou进行。

b.原yin:shi剂盒内容物wei能充分回。

解决办法:确定shi剂盒内容物回温后zai进行操作。

c.原yin:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请yu操作步zhou4,适dang延长温育时间。

d.原yin:wei使用shi剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用shi剂盒内suo提供的清洗液清洗。

e.原yin:shi剂盒已过有效期限。

解决办法:请更huan成仍在有效期限内的shi剂盒。

2. 标准qu线线xing不佳,或是平行xing不好。

a.原yin:温育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透feng(如抽屉内)

b.原yin:操作时间拖太久。

解决办法:请在方法shu练后zai进行操作。

c.原yin:wei孔间相互wu萰inⅫ/span>

解决办法: jia样pin蔮ao胄⌒奈鸾Τ鰓ei孔wai,以免造成qi它wei孔的wu萰inⅫ/span>

d.原yin:标准pin或酶标ji物suojia入的量不yi致。

解决办法:请使用已xiao正过的移液枪,并确baoqi与xi头之间有gao度密合xing。

e.原yin:添jia样pin或shi剂的操作方法不正确。

解决办法:jia样pin或shi剂蔮ao瑇i头请勿接触wei孔。

f.原yin:洗板过程发生问题(如guan路dusai、洗wan板后weili刻进行xiayi步zhou)

解决办法:请随时jian控洗板机洗板过程,洗wan后li即进行xiayi步zhou。

3. xi光zhi均偏gao(或线xing不够dou)

a.原yin:室温太gao(>25)

解决办法: 若wu法降低室内温度,请适dang缩短步zhou4的温育时间。

b.原yin:底物溶液受到wu萰inⅫ/span>

解决办法: 若发蟴hi孜锶芤阂殉氏zhi璴an色,请不要zai使用。

c.原yin:反ying时间chao过太久。

解决办法:请控謕in磞ing时间。

d.原yin:酶标ji物wu染liao盒内qi它shi剂。

解决办法:使用过的xi头yingli即丢弃,可避免shi剂间相互wu染,凡是shi剂(tebie是酶标ji物与底物溶液)接触过的容器yingli即清洗干净。(先以漂白shui浸泡,zai以清shui冲洗干净,可确baowu残留)

4. 阴xing标准pin的xi光zhi低yu阳xing标准pin的xi光zhi。

a.原yin:wei孔中的shi剂wei能充分混合。

解决办法: shi剂jiawan后,需轻敲pansi周使qi充分混合均匀。

b.原yin:洗板过程发生问题(tong2-f.)

解决办法:请参kao2-f.

c.原yin:添jia样pin或酶标ji物的量不yi致。

解决办法: 请参kao2-d.

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