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人白介素1α(IL-1α)试剂盒

如果您对gai荣yideng耲i行巳さ膆ua,可以
荣yideng录ming称: 人白介素1α(IL-1α)试剂盒
荣yideng录xing号: IL-1α
荣yideng录展商: ELISA试剂盒
荣yideng录文dang: 无xiang关文dang

jian单介绍

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人白介素1α(IL-1α)试剂盒  的详蟜u樯埸/font>


白介素1α(IL-1α)试剂盒

使用说ming书

白介素1α(IL-1α)试剂盒基本原理:

采用双荣yideng耲i衳inELISA法。用抗人IL-1α荣yideng录bao被于meibiao板上,实验时yangpin或biaozhunpin中的人IL-1α与bao被荣yideng录结合,游li的成分被洗qu。襩ai渭尤肷锼鼗目谷薎L-1α荣yideng录和la根guo氧化物meibiao记的亲和素。抗人IL-1α荣yideng录与结合zaibao被荣yideng录上的人IL-1α结合、生物素与亲和素特异性结合而形成**复合物,游li的成分被洗qu。加入显se底物(TMB),TMBzaila根guo氧化物mei的催化下呈现蓝se,加终止液后变成黄se。用meibiao仪zai450nmbo长处ceOD值,人IL-1αnongdu与OD450值之间呈正比,通guo绘制biaozhunqu线ji算出yangpin中人IL-1α的nongdu。

白介素1α(IL-1α)试剂盒描述:

英文ming称 Human IL-1α (Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit
中文ming称 人白介素1α(IL-1α)mei联**xifuce定试剂盒
货号 X-EL-H0088c 种属 Human/人
guige 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双荣yideng耲i衳in法
检ce范围 3.906~250pg/mL ling敏du 2.344pg/mL

试剂盒组成:

中文ming称

英文ming称

guige

bao存

  ELISAmeibiao板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biaozhunpin

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biaozhunpin&yangpin稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生物素化荣yideng录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化荣yideng录稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRP胒u岷衔铧/span>

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

胒u岷衔锵∈鸵裹/span>

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

穋ongχ罩挂裹/span>

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣yideng录说ming书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说ming
*: [96T/48T](打kaibao装后qing及时检查所you物pin是否qi全完整)
#: yi周内使用可存于4℃,需长时间存放或多磜en褂胘ian议存于-20.                                      

白介素1α(IL-1α)试剂盒检ce前zhun备工zuo:

1. qing提前20分zhongcong冰箱中取出试剂簒iao絟eng至室温。

2. 将nong缩洗祔ou河盟珃heng水稀释(1:25)。蝐ong猛甑姆呕?/span>4℃。cong冰箱中取出的nong缩洗祔ou嚎蒼engyou结晶,属于正常现象,可用40℃水浴wei加热使结晶完全溶解后再配制洗祔ou海尤任耫u不要超guo50℃,使用时洗祔ou河ξ椅拢5比帐褂谩Ⅻ/span>

3. biaozhunpin10000×glixin1分zhong,加入biaozhunpin&yangpin稀释液1.0mL至冻干biaozhunpin謝iao鬵uan盖,静置10分zhong,上下颠倒数次,daiqi充分溶解后,用移液qi将qi轻轻混匀(nongdu为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接zai穋ong字薪斜侗认∈停ian议配制成以下nongdu:按照稀释方法图例 biaozhunpin&yangpin稀释液直接zuo为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiaozhunpin:取0.5mL10ng/mL的上述biaozhunpin加入hanyou0.5mLbiaozhunpin&yangpin稀释液的EPguan謝iao煸燃纯桑琿iyunongdu襩ai死嗤啤Ⅻ/span> 

4. 生物素化荣yideng录工zuo液:实验前ji算当磜en笛樗栌昧浚ㄒ狱/span>100μL/縵hun疲导逝渲剖庇Χ嗯渲劈/span>100-200μL。使觤en?/span>15分zhong,以生物素化荣yideng录稀释液稀释nong缩生物素化荣yideng录(1:100)成工zuonongdu。当日使用。

5. 胒u岷衔锕uo液:实验前ji算当磜en笛樗栌昧浚ㄒ狱/span>100μL/縵hun疲导逝渲剖庇Χ嗯渲劈/span>100-200μL。使觤en?/span>15分zhong,以胒u岷衔锵∈鸵合∈蚽ong缩HRP胒u岷衔铧/span>(1:100)成工zuonongdu。

当日使用。

白介素1α(IL-1α)试剂盒biaozhunpin稀释方法图例:(以500μL/guan为例,也可根据实际用量lai稀释,如200μL/guan)

            

1. zaige孔中加入biaozhunpin或yangpinge100μL 37℃孵育90分zhong

2. 加入100μ生物素化荣yideng录工zuo液,37℃孵育60分zhong

3. 洗di3

4. 加入100μL胒u岷衔锕uo液, 37℃孵育30分zhong

5. 洗di5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分zhong左you

7. 加入50μL终止液,li即zai450nmbo长处ce量OD

8. 结果ji算

yi、操zuoyin素对ELISA结果的影xiangELISA操zuobu骤复杂,操zuo不当将引起jiao大的wu差。以下叙述ge个bu骤中的影xiangyin素。

1.加yang

2.温育

3.洗di

4.显se

5.比se

二、灰区的设置通常qing况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”lai报告结果,两者间youyi条分界线被称为“阳性判duan值ao?/span>cut-off valueCO值),这是定性**ce定结果报告的依据。

三、biao本复查ELISA手工检ceguocheng复杂,影xiangyin素jiao多,即使室内质控zai控,也可nengyin縵hun洳钜於斐山峁牟钜欤瑈in此加大复查力du是bao证结果zhun确性的可靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、弱阳性biao本及少见mo式的检ce结果进行复查。

四、结果判duan和报告常用下lieji种方法表示结果:

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果襤ua阋缘蝑u表示。

3.定量ce定 糲ong脃i知量的biaozhunpinzuoyi系lie稀释后进行ELISAce定,绘制biaozhunqu线,结果以优liang量或单位表示。zaiELISA定量检ce中每yikuai穋ongΠ錮ubi须绘制xiang应的biaozhunqu线。

注意事项:

仔细阅读说ming书。

检查试剂盒biao签上的youxiao期。如果超guoyouxiao期,qingwu使用。

按说ming书确定所you试剂qi全(数量、体积)。

biao本制备要gui范,每份biao本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意di温bao存。

zhun备好所you实验额外所需物pin,(比如移液qi,试guan,清洗qi,meibiao仪)。

按说ming书将所用试剂平heng至室温,根据检cebiao本数量确定所需试剂的量。

检查试剂簒in诿恐质约恋闹嫣跫琤ao证所you试剂均按照试剂簒in谒祄ing书推jian的条件存储。

检查不稳定或者变质的试剂溶液(比如沉淀或变se)。you些试剂,比如biaozhunpin稀释液或者检ce稀释液,可nengzai设ji时jiuhanyou沉淀物。所you试剂zai滴入meibiao板之前,bi需充分混匀。而由于沉淀物的特性,zai加入meibiao板之前,bi需不停搅拌。

bao证充分的孵育时间和温du。

qiewu使用不tong生chan批号的试剂取代蟴hong惺约粱蚧旌舷zhong惺约痢Ⅻ/span>

zai混合或溶解蛋白溶液蔮ao苊馀菽璫han生。

zai实验kai始之前,安排好实验流cheng。

zai实验kai始之前,清洁工zuo台。

若youwen题,应与我公si或代理商的ji术支持联系

白介素1α(IL-1α)试剂盒结果判duan:

1. 每个biaozhunpin的OD值减qu空白孔的OD值后zuo图,如设謒ei纯祝蛴θi平均值ji算。以biaozhunpin的nongdu为横坐biao,OD值为zong坐biao,绘出biaozhunqu线。yi可以OD值为横坐biao,biaozhunpin的nongdu为zong坐biao,绘出biaozhunqu线。

2. 推jian使用专襠ang膓u线制zuoruan件,如curve expert 1.31.4,zairuan件界面既可根据yangpinOD值,由biaozhunqu线查出xiang应的nongdu,乘以稀释倍数;yi可将yangpin的OD值代入biaozhunqu线的拟合方cheng式,ji算出yangpinnongdu,再乘以稀释倍数,即为yangpin的实际nongdu。

3. 若yangpinOD值高于biaozhunqu线上限,应适当稀释后重ce,ji算nongdu时应乘以稀释倍数。 

白介素1α(IL-1α)试剂盒youxiao期稳定性考察

本试验以白介素1α(IL-1α)为例

1.  OD值:

正常bao存条件下youxiao期内和超guoyouxiao期2个yue所ceOD值比jiao

正常youxiao期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2个yueyouxiao期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血清及血浆中加入yi定量的白介素1α(IL-1α)biaozhunpin,重复ce定并ji算qipin均值,回收率为ce定謉i肜韑un謉ang谋嚷省Ⅻ/span>

        正常bao存条件下youxiao期内和guoyouxiao期2个yueelisa 试剂盒回收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值血清及血浆中加入yi定量的白介素1α(IL-1α)biaozhunpin,并将biao本按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围即为稀释后yang本中白介素1α(IL-1α)han量的ce定謉i肜韑un謉ang谋嚷省Ⅻ/span>

         正常bao存条件下youxiao期内和guoyouxiao期2个yueelisa 试剂盒回线性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jing密du:以yangpince定謉ang谋湟煜凳?span>CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取tongyi批磜en约梁卸詃i值,中值和高值yang本进行定量检ce,每份yang本ce定20次,分别ji算不tongnongduyang本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 个不tong批次的试剂盒分别对di、中、高值定值yang本进行定量ce定, 每个yang本使用tongyi试剂盒重复ce定 8 次,分别ji算不tongnongduyang本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常bao存条件下youxiao期内和guoyouxiao期2个yueelisa 试剂盒回jing密du检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

白介素1α(IL-1α)试剂盒会出现的wen题及解决办法:

1. 加入穋ongχ罩挂汉螅琺eiyouxi光值或xi光值偏di。

a.原yin:未加入meibiao记物。

解决办法:qing按照操zuobu骤进行。

b.原yin:试剂簒in谌菸镂磏eng充分回。

解决办法:确定试剂簒in谌菸锘匚潞笤俳胁賨uo。

c.原yin:室温太di。

解决办法:若室温太di(<19),qing于操zuobu骤4,适当延长温育时间。

d.原yin:未使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: qing用试剂簒in谒峁┑那逑匆呵逑础Ⅻ/span>

e.原yin:试剂盒yiguoyouxiao期限。

解决办法:qing更换成仍zaiyouxiao期限内的试剂盒。

2. biaozhunqu线线性不佳,或是平行性不好。

a.原yin:温育位置避光不簃ei蚴艿狡鞲扇拧Ⅻ/span>

解决办法: qing确认温育位置既不透光也不透风(如chou屉内)

b.原yin:操zuo时间拖太久。

解决办法:qingzai方法熟练后再进行操zuo。

c.原yin:wei縵hun鋢iang互污染。

解决办法: 加yangpin蔮ao琿ing小xinwu溅出wei孔外,以免造成qitawei孔的污染。

d.原yin:biaozhunpin或meibiao记物所加入的量不yi致。

解决办法:qing使用yixiao正guo的移液枪,并确baoqi与xi头之间you高du密合性。

e.原yin:添加yangpin或试剂的操zuo方法不正确。

解决办法:加yangpin或试剂蔮ao瑇i头qingwu接触wei孔。

f.原yin:洗板guocheng发生wen题(如guan路堵塞、洗完板后未like进行下yibu骤)

解决办法:qing随时监控洗板机洗板guocheng,洗完后li即进行下yibu骤。

3. xi光值均偏高(或线性不够陡)

a.原yin:室温太高(>25)

解决办法: 若无法降di室内温du,qing适当缩短bu骤4的温育时间。

b.原yin:底物溶液受到污染。

解决办法: 若发现底物溶液yi呈现淡蓝se,qing不要再使用。

c.原yin:穋ongκ奔涑琯uo太久。

解决办法:qing控謕incongκ奔洹Ⅻ/span>

d.原yin:meibiao记物污染了簒in趒ita试剂。

解决办法:使用guo的xi头应li即丢qi,可避免试糽iang鋢iang互污染,凡是试剂(特别是meibiao记物与底物溶液)接触guo的容qi应li即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确bao无can留)

4. 阴性biaozhunpin的xi光值di于阳性biaozhunpin的xi光值。

a.原yin:wei孔中的试剂未neng充分混合。

解决办法: 试糽iang油旰螅枨崆门趟闹苁筿i充分混合均匀。

b.原yin:洗板guocheng发生wen题(tong2-f.)

解决办法:qingcan考2-f.

c.原yin:添加yangpin或meibiao记物的量不yi致。

解决办法: qingcan考2-d.

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