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人白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he

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荣一登录名称: 人白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he
荣一登录型号: IL-1ra/IL-1F3
荣一登录展商: ELISAshi剂he
荣一登录文dang: 无相关文dang

简单介绍

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人白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he  de详xi介绍


白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he

shi用说明书

白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he基本原li:

采用双荣一登录紉ing腅LISA法。用kang人IL-1ra荣一登耲i挥诿副臧錽hang,实验时样品或标zhun品zhongde人IL-1ra与包被荣一登录jie合,you离de成分被洗去。yi次加入shengwusu化dekang人IL-1ra荣一登录和辣genguoyang化wu酶标记de亲和su。kang人IL-1ra荣一登录与jie合在包被荣一登录shangde人IL-1rajie簒ihengwusu与亲和su特异性jie合而形成**复合wu,you离de成分被洗去。加入显se底wu(TMB),TMB在辣genguoyang化wu酶de催化xia呈现蓝se,加终止液后bian成黄se。用酶标仪在450nm波chang处测OD值,人IL-1ranong度与OD450值之jian呈正比,tongguo绘zhi标zhun曲xian计算出样品zhong人IL-1radenong度。

白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂hemiao述:

英文名称 Human IL-1ra/IF-1F3 (Interleukin 1 Receptor Antagonist) ELISA Kit
zhong文名称 人白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)酶lian**吸附测定shi剂he
货号 X-EL-H0089c 种属 Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双荣一登录紉ing姆?/span>
检测fan围 31.25~2000pg/mL 灵min度 18.75pg/mL

shi剂he组成:

zhong文名称

英文名称

规ge

保存

  ELISA酶标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标zhun品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标zhun品&样品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nongsuoshengwusu化荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

shengwusu化荣一登录xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nongsuoHRP酶jie合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶jie合wuxi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nongsuo洗祔ouhai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣一登录说明书

Product  Description

  1 

 

质检bao告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请ji时检查suo有wu品shi否qi全完整)
#: 一zhou内shi觤ei纱嬗冱/span>4℃,需chang时jian存放或多次shi用jian议存于-20.                                      

白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he检测前zhun备工作:

1. 请提前20分zhong从冰箱zhong取出shi剂he,平heng至室温。

2. 将nongsuo洗祔ou河盟珃heng水xi释(1:25)。未用完de放回4℃。从冰箱zhong取出denongsuo洗祔ou嚎赡苡衘iejing,属于正chang现xiang,可用40℃水浴微加热shijiejing完全溶解后zai配zhi洗祔ouhai尤任露炔粂ao超guo50℃,shi用时洗祔ou河ei室温)。dang日shi用。

3. 标zhun品10000×g离xin1分zhong,加入标zhun品&样品xi释液1.0mL至冻干标zhun品zhong,xuan紧管gai,静置10分zhong,shangxiadian倒数次,dai其充分溶解后,用yi液器将其qingqing混yun(nong度wei8000pg/mL)。然后gen据需yao进xing倍比xi释(注:不yao直接在反应孔zhong进xing倍比xi释)。jian议配zhi成以xianong度:an照xi释方法图例 标zhun品&样品xi释液直接作wei空白孔0ng/mL。如配zhi5ng/mL标zhun品:取0.5mL10ng/mLdeshang述标zhun品加入含有0.5mL标zhun品&样品xi释液deEP管zhong,混yun即可,其余nong度yi此类推。 

4. shengwusu化荣一登录工作襤ai菏笛榍凹扑鉪ang次实验suo需用liang(以100μL/縵hun疲导逝鋤hi时应多配zhi100-200μL。shi用前15分zhong,以shengwusu化荣一登录xi释液xi释nongsuoshengwusu化荣一登录(1:100)成工作nong度。dang日shi用。

5. 酶jie合wu工作襤ai菏笛榍凹扑鉪ang次实验suo需用liang(以100μL/縵hun疲导逝鋤hi时应多配zhi100-200μL。shi用前15分zhong,以酶jie合wuxi释液xi释nongsuoHRP酶jie合wu(1:100)成工作nong度。

dang日shi用。

白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he标zhun品xi释方法图例aiㄒ狱/span>500μL/管wei例,ye可gen据实际用liang来xi释,如200μL/管)

            

1. 在各孔zhong加入标zhun品或样品各100μL 37℃孵育90分zhong

2. 加入100μshengwusu化荣一登录工作襤ai?/span>37℃孵育60分zhong

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶jie合wu工作襤ai?/span> 37℃孵育30分zhong

5. 洗涤5

6. 加入90μL底wu溶襤ai?/span> 37℃孵育15分zhongzuoyou

7. 加入50μL终止襤ai⒓丛冱/span>450nm波chang处测liangOD

8. jie果计算

一、操作因suduiELISAjie果de影响ELISA操作步骤复杂,操作不dang将引起jiaodade误cha。以xia叙述各个步骤zhongde影响因su。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显se

5.比se

二、灰区deshe置tongchang情kuangxia,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来bao告jie果,两者jian有一tiao分jiexian被称wei“阳性舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),这shi定性**测定jie果bao告deyi据。

三、标本复查ELISA手工检测guo程复杂,影响因sujiao多,即shi室内质控在控,ye可能因縵hun鋍ha异而造成jie果decha异,因此加da复查力度shi保zhengjie果zhunque性祄u煽糠椒ǎ热鏳uiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项mu祄u蓎i、弱阳性标本jishao见mo式de检测jie果进xing复查。

四、jie果舩ie虾蚥ao告chang用xia列几种方法表示jie果:

1.定性测定

2.半定liang测定 jie果一般以di度表示。

3.定liang测定 即用已zhiliangde标zhun品作一系列xi释后进xingELISA测定,绘zhi标zhun曲xian,jie果以优良liang或单位表示。在ELISA定liang检测zhongmei一块反应板都必须绘zhi相应de标zhun曲xian。

注yi事项:

仔xi阅du说明书。

检查shi剂he标签shangde觴ing凇H绻琯uo觴ing冢胛餾hi用。

an说明书萬an╯uo有shi剂qi全(数liang、体积)。

标本zhi备yao规fan,mei份标本体积yaoan2-3个复孔以shangdeliangzhi备(贮存),尽liang分装做备份。短期内无法实验者,注yidi温保存。

zhun备好suo有实验额外suo需wu品,(比如yi液器,shi管,qing洗器,酶标仪)。

an说明书将suo用shi剂平heng至室温,gen据检测标本数liang萬an╯uo需shi剂deliang。

检查shi剂he内mei种shi剂de贮存tiao件,保zhengsuo有shi剂junan照shi剂he内说明书推荐detiao件存储。

检查不稳定或者bian质deshi剂溶襤aiū热鏲hen淀或bianse)。觴ing﹕hi剂,比如标zhun品xi释液或者检测xi释襤ai赡茉趕he计时就含有chen淀wu。suo有shi剂在di入酶标板之前,必需充分混yun。而由于chen淀wude特性,在加入酶标板之前,必需不停搅拌。

保zheng充分de孵育时jian和温度。

切勿shi用不同sheng产批号deshi剂取dai蟴hong衧hi剂或混合蟴hong衧hi剂。

在混合或溶解蛋白溶液时,bi免泡mo产sheng。

在实验开始之前,安排好实验流程。

在实验开始之前,qing洁工作台。

若有问题,应与我公薺ing騞aili商de技术支chilian系

白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂hejie果舩ie吸/span>:

1. mei个标zhun品deOD值jian去空白孔deOD值后作图,如she置复孔,则应取其平jun值计算。以标zhun品denong度wei横坐标,OD值wei纵坐标,绘出标zhun曲xian。亦可以OD值wei横坐标,标zhun品denong度wei纵坐标,绘出标zhun曲xian。

2. 推荐shi用zhuan襠ang那鷛ianzhi作软件,如curve expert 1.31.4,在软件jie面既可gen据样品OD值,由标zhun曲xian查出相应denong度,乘以xi释倍数;亦可将样品deOD值dai入标zhun曲xiande拟合方程式,计算出样品nong度,zai乘以xi释倍数,即wei样品de实际nong度。

3. 若样品OD值高于标zhun曲xianshang限,应适dangxi释后重测,计算nong度时应乘以xi释倍数。 

白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he觴ing谖榷ㄐ钥疾朦/span>

本shi验以白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)wei例

1.  OD值:

正chang保存tiao件xia觴ing谀诤统琯uo觴ing冱span>2个月suo测OD謉ang萰iao

正chang觴ing谀冱span>OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2个月觴ing冱/span>OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血qingji血浆zhong加入一定liangde白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)标zhun品,重复测定并计算其品jun值,回收率wei测定值与li论謉ang谋嚷省Ⅻ/span>

        正chang保存tiao件xia觴ing谀诤蚲uo觴ing冱span>2个月elisa shi剂he回收率检测jie果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. xian性:分别于定值血qingji血浆zhong加入一定liangde白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)标zhun品,并将标本an1:2,1:4,1:8xi释,xian性fan围即weixi释后样本zhong白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)含liangde测定值与li论謉ang谋嚷省Ⅻ/span>

         正chang保存tiao件xia觴ing谀诤蚲uo觴ing冱span>2个月elisa shi剂he回xian性检测jie果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jingmi度:以样品测定謉ang腷ian异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内cha:取同一批次shi剂heduidi值,zhong值和高值样本进xing定liang检测,mei份样本测定20次,分别计算不同nong度样本de平jun值和SD值。

批jiancha:选取 3 个不同批次deshi剂he分别duidi、zhong、高值定值样本进xing定liang测定, mei个样本shi用同一shi剂he重复测定 8 次,分别计算不同nong度样本de平jun值ji SD 值。(批内cha: CV<10%;批jiancha: CV<11%)

       正chang保存tiao件xia觴ing谀诤蚲uo觴ing冱span>2个月elisa shi剂he回jingmi度检测jie果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

白介su1受体拮kang剂(IL-1ra/IL-1F3)shi剂he会出现de问题ji解决办法:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值piandi。

a.原因:未加入酶标记wu。

解决办法:请an照操作步骤进xing。

b.原因:shi剂he内容wu未能充分回。

解决办法:萬an╯hi剂he内容wu回温后zai进xing操作。

c.原因:室温太di。

解决办法:若室温太di(<19),请于操作步骤4,适dang延chang温育时jian。

d.原因:未shi用shi剂hedeqing洗液qing洗。

解决办法: 请用shi剂he内suo提供deqing洗液qing洗。

e.原因:shi剂he已guo觴ing谙蕖Ⅻ/span>

解决办法:请更换成reng在觴ing谙弈赿eshi剂he。

2. 标zhun曲xianxian性不佳,或shi平xing性不好。

a.原因:温育位置bi光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请que认温育位置既不透光ye不透feng(如抽屉内)

b.原因:操作时jiantuo太久。

解决办法:请在方法熟练后zai进xing操作。

c.原因:微縵hun湎鄅u污染。

解决办法: 加样品时,请小xin勿溅出微孔外,以免造成其它微孔de污染。

d.原因:标zhun品或酶标记wusuo加入deliang不一致。

解决办法:请shi用已校正guodeyi液枪,并que保其与吸头之jian有高度mi合性。

e.原因:tian加样品或shi剂de操作方法不正que。

解决办法:加样品或shi剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板guo程发sheng问题(如管耭an氯⑾赐臧搴笪戳⒖探鴛ingxia一步骤)

解决办法:请随时监控洗板机洗板guo程,洗完后立即进xingxia一步骤。

3. 吸光值junpian高(或xian性不gou陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办法: 若无法降di室内温度,请适dangsuo短步骤4de温育时jian。

b.原因:底wu溶液受到污染。

解决办法: 若发现底wu溶液已呈现淡蓝se,请不yaozaishi用。

c.原因:反应时jian超guo太久。

解决办法:请控zhi反应时jian。

d.原因:酶标记wu污染了he内其它shi剂。

解决办法:shi用guode吸头应立即丢弃,可bi免shi剂jian相hu污染,凡shishi剂(特别shi酶标记wu与底wu溶液)接触guode容器应立即qing洗干jing。(先以piao白水浸泡,zai以qing水chong洗干jing,可que保无残留)

4. 阴性标zhun品de吸光值di于阳性标zhun品de吸光值。

a.原因:微孔zhongdeshi剂未能充分混簒iⅫ/span>

解决办法: shi剂加完后,需qing敲盘四zhoushi其充分混合junyun。

b.原因:洗板guo程发sheng问题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原因:tian加样品或酶标记wudeliang不一致。

解决办法: 请参考2-d.

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