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ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒

ru果您dui该荣一登lugan兴趣的话,可以
荣一登luming称: ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒
荣一登lu型号: AMH
荣一登lu展商: ELISAshi剂盒
荣一登lu文档: 无相guan文档

简单介绍

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ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒  的详细介绍


ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒

使yong说明shu

ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒基本原理:

本shi剂盒采yong双荣一登lu夹心ELISA法。yong抗renAMH荣一登lu包被于mei标板shang,shi验时yang品或标准品中的renAMH与包被荣一登lu结合,you离的成分被洗去。yi次加ru生wu素hua的抗renAMH荣一登lu和辣根过氧huawumei标记的qin和素。抗renAMH荣一登lu与结簒ian诎蝗僖坏莑ushang的renAMH结合、生wu素与qin和素特yi性结合而形成**fu合wu,you离的成分被洗去。加ruxian色底wu(TMB),TMB在辣根过氧huawumei的催huaxia呈现蓝色,加终止液后变成黄色。yongmei标仪在450nmbo长处测OD值,renAMH浓度与OD450值之间硈hou龋ü鎧hi标准曲线计算chuyang品中renAMH的浓度。

ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒描shu:

英文ming称 Human AMH (Anti-Mullerian Hormone) ELISA Kit
中文ming称 ren抗缪勒管**(AMH)mei联**xi附测定shi剂盒
货号 X-EL-H0317c 种属 Human/ren
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双荣一登lu夹心法
检测范围 93.75~6000pg/mL 灵min度 56.25pg/mL

shi剂盒组成:

中文ming称

英文ming称

gui格

保cun

  ELISAmei标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&yang品稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生wu素hua荣一登lu

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素hua荣一登lu稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

mei结合wu稀shi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗祔ouhai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

fan应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣一登lu说明shu

Product  Description

  1 

 

质检报gao

Certificate of Analysis

  1 

 

特bie说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查suo有wu品是否齐全完整)
#: 一周na使yong可cun于4℃,需长时间cunfang或多次使yong建议cun于-20.                                      

ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分钟cong冰箱中取chushi剂盒,平衡至室wen。

2. 将浓缩洗祔ou簓ong双蒸水稀shi(1:25)。未yong完的fanghui4℃。cong冰箱中取chu的浓缩洗祔ou嚎赡苡薪峋В粲谡O窒螅蓎ong40℃水浴微加热使结晶完全溶jie后再配zhi洗祔ouhai尤葁en度不yao超过50℃,使yong时洗祔ou河ξ襴en)。当ri使yong。

3. 标准品10000×g离心1分钟,加ru标准品&yang品稀shi液1.0mL至冻干标准品中,旋jin管盖,静置10分钟,shangxiadian倒数次,dai其充分溶jie后,yongyi液器将其轻轻混yun(浓度为8000pg/mL)。ran后根据需yao进行倍比稀shi(注:不yao直接在fan应孔中进行倍比稀shi)。建议配zhi成以xia浓度:an照稀shi方法图例 标准品&yang品稀shi液直接作为空白孔0ng/mL。ru配zhi5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的shangshu标准品加ru含有0.5mL标准品&yang品稀shi液的EP管中,混yun即可,其余浓度yi磗i嗤啤Ⅻ/span> 

4. 生wu素hua荣一登lu工作襤ai簊hi验前计算当次shi验suo需yong量(以100μL/孔计),shi际配zhi时应多配zhi100-200μL。使yong前15分钟,以生wu素hua荣一登lu稀shi液稀shi浓缩生wu素hua荣一登lu(1:100)成工作浓度。当ri使yong。

5. mei结合wu工作襤ai簊hi验前计算当次shi验suo需yong量(以100μL/孔计),shi际配zhi时应多配zhi100-200μL。使yong前15分钟,以mei结合wu稀shi液稀shi浓缩HRPmei结合wu(1:100)成工作浓度。

当ri使yong。

ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒标准品稀shi方法图例aiㄒ狱/span>500μL/管为例,也可根据shi际yong量来稀shi,ru200μL/管)

            

1. 在各孔中加ru标准品或yang品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加ru100μ生wu素hua荣一登lu工作襤ai?/span>37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加ru100μLmei结合wu工作襤ai?/span> 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加ru90μL底wu溶襤ai?/span> 37℃孵育15分钟左you

7. 加ru50μL终止襤ai琹i即在450nmbo长处测量OD

8. 结果计算

一、操作因素duiELISA结果的影xiangELISA操作步骤fu杂,操作不当将yin起较da的误cha。以xia叙shu各个步骤中的影xiang因素。

1.加yang

2.wen育

3.洗涤

4.xian色

5.比色

二、灰区的设置通常情况xia,ELISA定性shi验以“阳性”和“yin性”来报gao结果,liang者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报gao的yi据。

三、标本fu查ELISA手工检测过程fu杂,影xiang因素较多,即使室na质控在控,也可能因孔间chayi而造成结果的chayi,因此加dafu查li度是保证结果准确性的可靠方法,比ruduiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见mo蔶iang募觳饨峁衒u查。

四、结果判断和报gao常yongxia列几种方法biao示结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一般以滴度biao示。

3.定量测定 即yong已zhi量的标准品作一系列稀shi后进行ELISA测定,绘zhi标准曲线,结果以优liang量或单位biao示。在ELISA定量检测中每一kuaifan应板都必须绘zhi相应的标准曲线。

注意事项:

仔细阅读说明shu。

检查shi剂盒标签shang的有效期。ru果超过有效期,请勿使yong。

an说明shu确定suo有shi剂齐全(数量、体积)。

标本zhi备yaogui范,每份标本体积yaoan2-3个fu孔以shang的量zhi备(贮cun),尽量分装做备份。duan期na无法shi验者,注意低wen保cun。

准备haosuo有shi验额外suo需wu品,(比ruyi液器,shi管,清洗器,mei标仪)。

an说明shu将suoyongshi剂平衡至室wen,根据检测标本数量确定suo需shi剂的量。

检查shi剂盒na每种shi剂的贮cun条件,保证suo有shi剂均an照shi剂盒na说明shu推荐的条件cunchu。

检查不wen定或者变謘hi膕hi剂溶襤aiū萺uchen淀或变色)。有些shi剂,比ru标准品稀shi液或者检测稀shi襤ai赡茉谏杓剖本秃衏hen淀wu。suo有shi剂在祑en雖ei标板之前,必需充分混yun。而由于chen淀wu的特性,在加rumei标板之前,必需不停jiao拌。

保证充分的孵育时间和wen度。

切勿使yong不tong生chan批号的shi剂取代现有shi剂或混合现有shi剂。

在混合或溶jie蛋白溶液时,避免泡沫chan生。

在shi验开始之前,an排haoshi验流程。

在shi验开始之前,清洁工作台。

若有问题,应与我公薺ing虼砩痰募际鮶hi持联系

ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,ru设謒ei纯祝蛴θ∑淦骄导扑恪R员曜计返呐ǘ任嶙辏?/span>OD值为纵坐标,绘chu标准曲线。yi可以OD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘chu标准曲线。

2. 推荐使yong专业的曲线zhi作软件,rucurve expert 1.31.4,在软件界mian既可根据yang品OD值,由标准曲线查chu相应的浓度,乘以稀shi倍数;yi可将yang品的OD值代ru标准曲线的拟合方程式,计算chuyang苀angǘ龋俪艘韵hi倍数,即为yang品的shi际浓度。

3. 若yang品OD值高于标准曲线shang限,应蕇hi毕hi后重测,计算浓度时应乘以稀shi倍数。 

ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒有效期wen定性考察

本shi验以抗缪勒管**(AMH)为例

1.  OD值:

正常保cun条件xia有效期na和超过有效期2个月suo测OD值比较

正常有效期naOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.huishou率:分bie于定值血清及血浆中加ru一定量的抗缪勒管**(AMH)标准品,重fu测定bing计算其品均值,huishou率为测定值与理论值的比率。

        正常保cun条件xia有效期na和过有效期2个月elisa shi剂盒huishou率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分bie于定值血清及血浆中加ru一定量的抗缪勒管**(AMH)标准品,bing将标本an1:2,1:4,1:8稀shi,线性范围即为稀shi后yang本中抗缪勒管**(AMH)含量的测定值与理论值的比率。

         正常保cun条件xia有效期na和过有效期2个月elisa shi剂盒hui线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以yang品测定值的变yi系数CVbiao示。CV%=SD/meanx100

批nacha:取tong一批次shi剂盒dui低值,中值和高值yang本进行定量检测,每份yang本测定20次,分bie计算不tong浓度yang本的平均值和SD值。

批间cha:选取 3 个不tong批次的shi剂盒分biedui低、謝iao⒏咧刀ㄖ祔ang本进行定量测定, 每个yang本使yongtong一shi剂盒重fu测定 8 次,分bie计算不tong浓度yang本的平均值及 SD 值。(批nacha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       正常保cun条件xia有效期na和过有效期2个月elisa shi剂盒hui精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

ren抗缪勒管**(AMH)shi剂盒会chu现的问题及jie决办法:

1. 加rufan应终止液后,没有xi光值或xi光值偏低。

a.原因:未加rumei标记wu。

jie决办法:请an照操作步骤进衳iaoⅫ/span>

b.原因:shi剂盒na容wu未能充分hui。

jie决办法:确定shi剂盒na容wuhuiwen后再进行操作。

c.原因:室wen太低。

jie决办法:若室wen太低(<19),请于操作步骤4,蕇hi毖映en育时间。

d.原因:未使yongshi剂盒的清洗液清洗。

jie决办法: 请yongshi剂盒nasuo提供的清洗液清洗。

e.原因:shi剂盒已过有效期限。

jie决办法:请更换成仍在有效期限na的shi剂簒iaoⅫ/span>

2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不hao。

a.原因:wen育位置避光不hao或受到气流干扰。

jie决办法: 请确认wen育位置既不透光也不透风(ruchoutina)

b.原因:操作时间拖太jiu。

jie决办法:请在方法shu练后再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

jie决办法: 加yang品时,请xiao心勿溅chu微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:标准品或mei标记wusuo加ru的量不一zhi。

jie决办法:请使yong已校正过的yi液枪,bing确保其与xi头之间有高度密合性。

e.原因:添加yang品或shi剂的操作方法不正确。

jie决办法:加yang品或shi剂时,xi头请勿接触微孔。

f.原因:洗板过程发生问题(ru管lu堵塞、洗完板后未like进行xia一步骤)

jie决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后li即进行xia一步骤。

3. xi光值均偏高(或线性不gou陡)

a.原因:室wen太高(>25)

jie决办法: 若无法jiang低室nawen度,请蕇hi彼鮠uan步骤4的wen育时间。

b.原因:底wu溶液受到污染。

jie决办法: 若发现底wu溶液已呈现淡蓝色,请不yao再使yong。

c.原因:fan应时间超过太jiu。

jie决办法:请控zhifan应时间。

d.原因:mei标记wu污染了盒na其它shi剂。

jie决办法:使yong过的xi头应li即丢弃,可避免shi糽iang湎嗷ノ廴荆彩莝hi剂(特bie是mei标记wu与底wu溶液)接触过的容器应li即清洗干jing。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干jing,可确保无残留)

4. yin性标准品的xi光值低于阳性标准品的xi光值。

a.原因:微孔中的shi剂未能充分混合。

jie决办法: shi糽iang油旰螅枨崆门趟闹苁蛊涑浞只旌暇鵼un。

b.原因:洗板过程发生问题(tong2-f.)

jie决办法:请参考2-f.

c.原因:添加yang品或mei标记wu的量不一zhi。

jie决办法: 请参考2-d.

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