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人瘦素受体(LEPR)试剂盒

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rongyideng录名称: 人瘦素受体(LEPR)试剂盒
rongyideng录型hao: LEPR
rongyideng录展商: ELISA试剂盒
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简单介绍

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人瘦素受体(LEPR)试剂盒  de详xi介绍


瘦素受体(LEPR)试剂盒

使用说明书

瘦素受体(LEPR)试剂盒ji本原li:

本试剂盒采用双rongyideng录夹xinELISA法。用kang人LEPRrongyideng录包被于酶biao板上,实验时样pin或biao譲i穤hongde人LEPR与包被rongyideng录结合,游lide成分被洗去。襩ai渭尤肷锼鼗痙ekang人LEPRrongyideng录helagen过氧化物酶biao记de亲he素。kang人LEPRrongyideng录与结簒ian诎籸ongyideng录上de人LEPR结簒i⑸锼赜肭議e素特异性结合erxing成**复合物,游lide成分被洗去。加入xian色底物(TMB),TMB在lagen过氧化物酶de催化下呈现蓝色,加zhongzhi液后变成黄色。用酶biao仪在450nm波长处测OD值,人LEPR浓度与OD450值之jian呈正bi,通过绘制biao准曲xianji算出样pinzhong人LEPRde浓度。

瘦素受体(LEPR)试剂盒miao述:

英文名称 Human LEPR (Leptin Receptor) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 人瘦素受体(LEPR)酶lian**吸附测定试剂盒
货hao X-EL-H0093c 謟hi簏/span> Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双rongyideng录夹xin法
检测范围 0.313~20ng/mL 灵min度 0.188ng/mL

试剂盒组成:

謝ing拿劈/span>

英文名称

规ge

保cun

  ELISA酶biao板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

biao譲i饵/span>&样pinxi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化rongyideng录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化rongyideng录xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物xi释液

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(避光)

反yingzhongzhi液

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

rongyideng录说明书

Product  Description

  1 

 

zhi检报gao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所觴ing飌in是否齐全wan整)
#: yizhou内使用kecun于4℃,需长时jiancun放或多磜en褂胘ianyicun于-20.                                      

瘦素受体(LEPR)试剂盒检测前准bei工作:

1. 请提前20分钟从bing箱zhong取出试剂盒,平衡至shiwen。

2. jiang浓缩洗祔ou河盟羲畑i释(1:25)。未用wande放hui4℃。从bing箱zhong取出de浓缩洗祔ou簁e能有结jing,属于正常现象,ke用40℃水yu微加re使结jingwan全溶解后zai配制洗祔ou海觬ewen度不yao超过50℃,使用时洗祔ou簓ing为shiwen)。当ri使用。

3. biao譲i饵/span>10000×glixin1分钟,加入biao譲i饵/span>&样pinxi释液1.0mL至冻干biao譲i穤hong,xuan紧管盖,jingzhi10分钟,上下颠倒数次,待其chong分溶解后,用移液器jiang其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后genju需yao进行倍bixi释(注:不yao直接在反ying孔zhong进行倍bixi释)。jianyi配制成以下浓度:按照xi释方法图例 biao譲i饵/span>&样pinxi释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mLde上述biao譲i芳尤牒宵/span>0.5mLbiao譲i饵/span>&样pinxi释液deEP管zhong,混匀即ke,其余浓度襩ai死嗤啤Ⅻ/span> 

4. 生物素化rongyideng录工作液:实验前ji算当磜en笛樗栌胠iang(以100μL/孔ji),实际配制时ying多配制100-200μL。使觤en?/span>15分钟,以生物素化rongyideng录xi释液xi释浓缩生物素化rongyideng录(1:100)成工作浓度。当ri使用。

5. 酶结合物工作液:实验前ji算当磜en笛樗栌胠iang(以100μL/孔ji),实际配制时ying多配制100-200μL。使觤en?/span>15分钟,以酶结合物xi释液xi释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当ri使用。

瘦素受体(LEPR)试剂盒biao譲i穢i释方法图例:(以500μL/管为例,也kegenju实际用lianglaixi释,如200μL/管)

            

1. 在各孔zhong加入biao譲i坊蜓鵳in各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生物素化rongyideng录工作液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结合物工作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟zuoyou

7. 加入50μLzhongzhi液,立即在450nm波长处测liangOD

8. 结果ji算

yi、操作yin素对ELISA结果de影响ELISA操作步骤复杂,操作不当jiang引起较大de误差。以下叙述各个步骤zhongde影响yin素。

1.加样

2.wen育

3.洗涤

4.xian色

5.bi色

二、灰区deshezhi通常qing况下,ELISA定性实验襶u皔ang衴u県e“阴衴u眑ai报gao结果,两者jian有yi条分界xian被称为“yang性判断值”(cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报gaode依ju。

三、biao本复查ELISA蕑hiぜ觳夤谈丛樱跋靬in素较多,即使shi内zhi控在控,也ke能yin孔jian差异er造成结果de差异,yin此加大复查力度是保证结果准确性祄u蒶ao方法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项mu祄u梢伞uoyang性biao本及少见模式de检测结果进行复查。

四、结果判断he报gao常用下lie几种方法表示结果:

1.定性测定

2.ban定liang测定 结果yiban以滴度表示。

3.定liang测定 即用已知liangdebiao譲i纷鱵i系liexi释后进行ELISA测定,绘制biao准曲xian,结果以优liangliang或单位表示。在ELISA定liang检测zhong每yi块反ying板都bi须绘制相yingdebiao准曲xian。

注意事项:

仔xi阅读说明书。

检查试剂盒biao签上de有效期。如果超过有效期,请勿使用。

按说明书确定所有试剂齐全(数liang、体积)。

biao本制beiyao规范,每份biao本体积yao按2-3个复孔以上deliang制bei(贮cun),尽liang分装做bei份。短期内wu法实验者,注意低wen保cun。

准bei好所有实验额wai所需物pin,(眗e缫埔浩鳎怨埽逑雌鳎竍iao仪)。

按说明书jiang所用试剂平衡至shiwen,genju检测biao本数liang确定所需试剂deliang。

检查试剂簒in诿恐zhi约羋e贮cun条jian,保证所有试剂均按照试剂簒in谒得魇橥苆iande条jiancun储。

检查不wen定或者变zhide试剂溶液(眗e绯羋ian或变色)。有些试糽ire鏱iao譲i穢i释液或者检测xi释液,ke能在sheji时就含有沉dian物。所有试剂在祑en朊竍iao板之前,bi需chong分混匀。er由于沉dian物de特性,在加入酶biao板之前,bi需不停jiao拌。

保证chong分de孵育时jianhewen度。

莤ing鹗褂貌煌鷆han批haode试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫chan生。

在实验开始之前,安排好实验流程。

在实验开始之前,清洁工作台。

ruo觴ing蕋i,ying与wo公司或代li商de技术zhi持lian系

瘦素受体(LEPR)试剂盒结果判断:

1. 每个biao譲i穌eOD值减去空白孔deOD值后作图,如shezhi复孔,则ying取其平均值ji算。以biao譲i穌e浓度为横坐biao,OD值为纵坐biao,绘出biao准曲xian。亦ke以OD值为横坐biao,biao譲i穌e浓度为纵坐biao,绘出biao准曲xian。

2. 推jian使用专yede曲xian制作软jian,如curve expert 1.31.4,在软jian界mian既kegenju样pinOD值,由biao准曲xian查出相yingde浓度,乘以xi释倍数;亦kejiang样pindeOD值代入biao准曲xiande拟合方程式,ji算出样pin浓度,zai乘以xi释倍数,即为样pinde实际浓度。

3. ruo样pinOD值高于biao准曲xian上限,ying适当xi释后重测,ji算浓度时ying乘以xi释倍数。 

瘦素受体(LEPR)试剂盒有效期wen定性考察

本试验以瘦素受体(LEPR)为例

1.  OD值:

正常保cun条jian下有效期内he超过有效期2个月所测OD值bi较

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.hui收率:分别于定值xue清及xue浆zhong加入yi定liangde瘦素受体(LEPR)biao譲i罚馗床舛╞ingji算其pin均值,hui收率为测定值与lilun值debi率。

        正常保cun条jian下有效期内he过有效期2个月elisa 试剂盒hui收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. xian性:分别于定值xue清及xue浆zhong加入yi定liangde瘦素受体(LEPR)biao譲i罚琤ingjiangbiao本按1:2,1:4,1:8xi释,xian性范围即为xi释后样本zhong瘦素受体(LEPR)含liangde测定值与lilun值debi率。

         正常保cun条jian下有效期内he过有效期2个月elisa 试剂盒huixian性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样pin测定值de变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同yi批磜en约梁卸缘椭担瑉hong值he高值样本进行定liang检测,每份样眏ing舛?span>20次,分别ji算不同浓度样本de平均值heSD值。

批jian差:选取 3 个不同批次de试剂盒分别对低、zhong、高值定值样本进行定liang测定, 每个样本使用同yi试剂盒重复测定 8 次,分别ji算不同浓度样本de平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正常保cun条jian下有效期内he过有效期2个月elisa 试剂盒hui精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

瘦素受体(LEPR)试剂盒hui出现dewenti及解决办法:

1. 加入反yingzhongzhi液后,没觴ing庵祷蛭庵灯汀Ⅻ/span>

a.原yin:未加入酶biao记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.原yin:试剂簒in谌菸镂茨躢hong分hui。

解决办法:确定试剂簒in谌菸飄uiwen后zai进行操作。

c.原yin:shiwen太低。

解决办法:ruoshiwen太低(<19),请于操作步骤4,适当延长wen育时jian。

d.原yin:未使用试剂盒de清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂簒in谒醙ongde清洗液清洗。

e.原yin:试剂盒已过有效期限。

解决办法:请更huan成仍在有效期限内de试剂盒。

2. biao准曲xianxian性不佳,或是平行性不好。

a.原yin:wen育位zhi避光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认wen育位zhi既不透光也不透风(如抽屉内)

b.原yin:操作时jian拖太jiu。

解决办法:请在方法熟练后zai进行操作。

c.原yin:微孔jian相互污染。

解决办法: 加样pin时,请小xin勿溅出微孔wai,以免造成其它微孔de污染。

d.原yin:biao譲i坊蛎竍iao记物所加入deliang不yi致。

解决办法:请使用已校正过de移液qiang,bing确保其与吸头之jian有高度密合衴uⅫ/span>

e.原yin:添加样pin或试剂de操作方法不正确。

解决办法:加样pin或试剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原yin:洗板过程发生wenti(如管lu堵塞、洗wan板后未立ke进行下yi步骤)

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗wan后立即进行下yi步骤。

3. 吸光值均偏高(或xian性不筯uan伏/span>)

a.原yin:shiwen太高(>25)

解决办法: ruowu法降低shi内wen度,请适当缩短步骤4dewen育时jian。

b.原yin:底物溶液受到污染。

解决办法: ruo发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不yaozai使用。

c.原yin:反ying时jian超过太jiu。

解决办法:请控謕in磞ing时jian。

d.原yin:酶biao记物污染了簒in谄渌约痢Ⅻ/span>

解决办法:使用过de吸头ying立即丢弃,ke避免试糽iang湎嗷ノ廴荆彩鞘约傈/span>(特别是酶biao记物与底物溶液)接触过de容器ying立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,zai以清水chong洗干净,ke确保wu残留)

4. 阴性biao譲i穌e吸光值低于yang性biao譲i穌e吸光值。

a.原yin:微孔zhongde试剂未能chong分混簒iⅫ/span>

解决办法: 试糽iang觲an后,需轻敲盘四zhou使其chong分混合均匀。

b.原yin:洗板过程发生wenti(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原yin:添加样pin或酶biao记物deliang不yi致。

解决办法: 请参考2-d.

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