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人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒 荣yidengluzhi备流程

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荣yidenglu名chen: 人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒 荣yidengluzhi备流程
荣yidenglu型号: FOS
荣yidenglu展商: ELISAshi剂盒
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简单jie绍

人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒 荣yidengluzhi备流程cai用双荣yidenglu夹xinELISA法。用kang人FOS荣yidenglu包被yu酶标板上,实验时yang品huo标zhun品中的人FOS与包被荣yidenglu结合,游离的成分被洗去。依次jia入生物素化的kang人FOS荣yidengluhe辣根过氧化物酶标记的亲he素。kang人FOS荣yideng耲ia虢岷蟴ai包被荣yidenglu上的人FOS结簒i⑸锼赜肭議e素te异性结合而形成**复合物,游离的成分被洗去。jia入显色底物(TMB),TMBzai辣根过氧化物酶的cui化下呈现蓝色,jia终止液hou变成黄色。用酶标仪zai450nmbo长处ceOD值,人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂簒inǘ扔隣D450值之间呈zhengbi,通过绘zhi标zhunqu线计suan出yang品中人FOS的浓度。


人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒 荣yidengluzhi备流程  的详蟜u樯埸/font>


人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒 荣yidengluzhi备流程

使用说ming书

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒基本原理:

本shi剂盒cai用双荣yidenglu夹xinELISA法。用kang人FOS荣yidenglu包被yu酶标板上,实验时yang品huo标zhun品中的人FOS与包被荣yidenglu结合,游离的成分被洗去。依次jia入生物素化的kang人FOS荣yidengluhe辣根过氧化物酶标记的亲he素。kang人FOS荣yideng耲ia虢岷蟴ai包被荣yidenglu上的人FOS结簒i⑸锼赜肭議e素te异性结合而形成**复合物,游离的成分被洗去。jia入显色底物(TMB),TMBzai辣根过氧化物酶的cui化下呈现蓝色,jia终止液hou变成黄色。用酶标仪zai450nmbo长处ceOD值,人FOS浓度与OD450值之间呈zhengbi,通过绘zhi标zhunqu线计suan出yang品中人FOS的浓度。

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒描述:

英文名chen Human V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog (FOS) ELISA Kit
中文名chen 人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)酶联**吸fuce定shi剂盒
huo号 E-EL-H0695c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双荣yidenglu夹xin法
检ce范围 0.156~10ng/mL ling敏度 0.094ng/mL

人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒 荣yidengluzhi备流程组成:

中文名chen

英文名chen

规格

保存

  ELISA酶标板(ke拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标zhun品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标zhun品&yang品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化荣yidenglu

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化荣yidengluxi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP胒u岷衔铧/span>

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(biguang)

胒u岷衔飜i释液

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(biguang)

反应终止液

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣yidenglu说ming书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

tebie说ming
*: [96T/48T](打开包装hou请及时检查所you物品是fu齐全完zheng)
#: yi周内使用ke存yu4℃,需长时间存放huo多磜en褂胘ian议存yu-20.                                      

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒检ce前zhun备工作:

1. 请提前20分钟从冰xiang中取出shi剂盒,平衡至shiwen。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸shuixi释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰xiang中取出的浓缩洗涤液ke能you结jing,属yuzheng常现xiang,ke用40℃shui浴微jia热使结jing完全溶解hou再peizhi洗涤液(jia热wen度不要chao过50℃,使用时洗涤液应weishiwen)。dangri使用。

3. 标zhun品yu10000×g离xin1分钟,jia入标zhun品&yang品xi释液1.0mL至dong干标zhun品中,旋紧管盖,jing置10分钟,上下颠倒shu次,dai其chong分溶解hou,用移液qi将其轻轻hun匀(浓度wei8000pg/mL)。然hou根据需要进行倍bixi释(注:不要直接zai反应孔中进行倍bixi释)。jian议peizhi成以下浓度:按照xi释方法tu例 标zhun品&yang品xi释液直接作weikong白孔0ng/mL。如peizhi5ng/mL标zhun品:取0.5mL10ng/mL的上述标zhun品jia入hanyou0.5mL标zhun品&yang品xi释液的EP管中,hun匀即ke,其余浓度依此类推。 

4. 生物素化荣yidenglu工作液:实验前计suandang磜en笛樗栌胠iang(以100μL/縵hun疲导蕄eizhi时应多peizhi100-200μL。使用前15分钟,以生物素化荣yidengluxi释液xi释浓缩生物素化荣yidenglu(1:100)成工作浓度。dangri使用。

5. 胒u岷衔锕ぷ饕海菏笛榍凹苨uandang磜en笛樗栌胠iang(以100μL/縵hun疲导蕄eizhi时应多peizhi100-200μL。使用前15分钟,以胒u岷衔飜i释液xi释浓缩HRP胒u岷衔铧/span>(1:100)成工作浓度。

dangri使用。

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒标zhun品xi释方法tu例:(以500μL/管wei例,yeke根据实际用liang来xi释,如200μL/管)

            

1. zai各孔中jia入标zhun品huoyang品各100μL 37℃孵育90分钟

2. jia入100μ生物素化荣yidenglu工作液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. jia入100μL胒u岷衔锕ぷ饕海?/span> 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. jia入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. jia入50μL终止液,立即zai450nmbo长处celiangOD

8. 结果计suan

yi、cao作因素对ELISA结果的影响ELISAcao作步骤复za,cao作不dang将引起较大的误差。以下叙述各ge步骤中的影响因素。

1.jiayang

2.wen育

3.洗涤

4.显色

5.bi色

二、灰区的设置通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”he“阴性”来报告结果,两者间youyi条分jie线被chenwei“阳性舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),这是定性**ce定结果报告的依据。

san、标本复查ELISA手工检ce过程复za,影响因素较多,即使shi内质控zai控,yeke能因縵hun洳钜於斐山峁牟钜欤虼薺ia大复查力度是保证结果zhun确性的ke靠方法,bi如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康膋e疑、弱阳性标本及少见模式的检ce结果进行复查。

四、结果舩ie蟞e报告常用下列ji种方法表示结果:

1.定性ce定

2.半定liangce定 结果yi般以滴度表示。

3.定liangce定 即用已知liang的标zhun品作yi系列xi释hou进行ELISAce定,绘zhi标zhunqu线,结果襷a帕糽ianghuo单位表示。zaiELISA定liang检ce中每yi块反应板都必xu绘zhi相应的标zhunqu线。

注意事项:

zixi阅读说ming书。

检查shi剂盒标签上的you效qi。如果chao过you效qi,请勿使用。

按说ming书确定所youshi剂齐全(shuliang、体积)。

标本zhi备要规范,每份标本体积要按2-3ge复孔以上的liangzhi备(贮存),尽liang分装做备份。短qi内无法实验者,注意低wen保存。

zhun备好所you实验额wai所需物品,(bi如移液qi,shi管,清洗qi,酶标仪)。

按说ming书将所用shi剂平衡至shiwen,根据检ce标本shuliang确定所需shi剂的liang。

检查shi剂簒in诿恐謘hi剂的贮存条件,保证所youshi剂均按照shi剂簒in谒祄ing书推荐的条件存储。

检查不稳定huo者变质的shi剂溶液(bi如chen淀huo变色)。you些shi剂,bi如标zhun品xi释液huo者检cexi释液,ke能zai设计时就hanyouchen淀物。所youshi剂zai滴入酶标板之前,必需chong分hun匀。而youyuchen淀物的te性,zaijia入酶标板之前,必需不停jiao拌。

保证chong分的孵育时间hewen度。

qie勿使用不tong生产批号的shi剂取代现youshi剂huohun合现youshi剂。

zaihun合huo溶解蛋白溶液时,bimian泡沫产生。

zai实验开始之前,安排好实验流程。

zai实验开始之前,清洁工作台。

若youwen题,应与我公司huo代理商的技术支持联系

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒结果舩ie吸/span>:

1. 每ge标zhun品的OD值减去kong白孔的OD值hou作tu,如设置复孔,ze应取其平均值计suan。以标zhun品的浓度wei横坐标,OD值wei纵坐标,绘出标zhunqu线。yike以OD值wei横坐标,标zhun品的浓度wei纵坐标,绘出标zhunqu线。

2. 推荐使用专业的qu线zhi作ruan件,如curve expert 1.3huo1.4,zairuan件jiemian既ke根据yang品OD值,you标zhunqu线查出相应的浓度,cheng以xi释倍shu;yike将yang品的OD值代入标zhunqu线的拟合方程式,计suan出yang品浓度,再cheng以xi释倍shu,即weiyang品的实际浓度。

3. 若yang品OD值高yu标zhunqu线上限,应适dangxi释hou重ce,计suan浓度时应cheng以xi释倍shu。 

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒you效qi稳定性考察

本shi验以V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)wei例

1.  OD值:

zheng常保存条件下you效qi内hechao过you效qi2geyue所ceOD謉ang冉吸/span>

zheng常you效qi内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chao过2geyueyou效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分bieyu定值血清及血浆中jia入yi定liang的V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)标zhun品,重复ce定并计suan其品均值,回收率weice定值与理论值的bi率。

        zheng常保存条件下you效qi内he过you效qi2geyueelisa shi剂盒回收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分bieyu定值血清及血浆中jia入yi定liang的V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)标zhun品,并将标本按1:2,1:4,1:8xi释,线性范围即weixi释houyang本中V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)hanliang的ce定值与理论值的bi率。

         zheng常保存条件下you效qi内he过you效qi2geyueelisa shi剂盒回线性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jing密度:以yang品ce定值的变异系shuCV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取tongyi批磜en约梁xie缘椭担兄礹e高值yang本进衳ie╨iang检ce,每份yang眏ing舛?span>20次,分bie计suan不tong浓度yang本的平均值heSD值。

批间差:选取 3 ge不tong批次的shi剂盒分bie对低、中、高值定值yang本进衳ie╨iangce定, 每geyang本使用tongyishi剂盒重复ce定 8 次,分bie计suan不tong浓度yang本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       zheng常保存条件下you效qi内he过you效qi2geyueelisa shi剂盒回jing密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌基因tongyuan物(FOS)shi剂盒会出现的wen题及解jueban法:

1. jia入反应终止液hou,没you吸guang值huo吸guang值偏低。

a.原因:未jia入酶标记物。

解jueban法:请按照cao作步骤进行。

b.原因:shi剂簒in趓ong物未能chong分回。

解jueban法:确定shi剂簒in趓ong物回wenhou再进行cao作。

c.原因:shiwen太低。

解jueban法:若shiwen太低(<19),请yucao作步骤4,适dang延长wen育时间。

d.原因:未使用shi剂盒的清洗液清洗。

解jueban法: 请用shi剂簒in谒峁┑那逑匆呵逑础Ⅻ/span>

e.原因:shi剂盒已过you效qi限。

解jueban法:请更换成rengzaiyou效qi限内的shi剂盒。

2. 标zhunqu线线性不佳,huo是平行性不好。

a.原因:wen育位置biguang不好huoshoudao气流干扰。

解jueban法: 请确renwen育位置既不透guangye不透风(如抽屉内)

b.原因:cao作时间拖太久。

解jueban法:请zai方法熟练hou再进行cao作。

c.原因:微縵hun湎嗷ノ廴尽Ⅻ/span>

解jueban法: jiayang品时,请小xin勿jian出微孔wai,以mian造成其它微孔的污染。

d.原因:标zhun品huo酶标记物所jia入的liang不yizhi。

解jueban法:请使用已校zheng过的移液枪,并确保其与吸头之间you高度密合性。

e.原因:添jiayang品huoshi剂的cao作方法不zheng确。

解jueban法:jiayang品huoshi剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板过程发生wen题(如管路堵塞、洗完板hou未立刻进行下yi步骤)

解jueban法:请sui时监控洗板机洗板过程,洗完hou立即进行下yi步骤。

3. 吸guang值均偏高(huo线性不够陡)

a.原因:shiwen太高(>25)

解jueban法: 若无法降低shi内wen度,请适dang缩短步骤4的wen育时间。

b.原因:底物溶液shoudao污染。

解jueban法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。

c.原因:反应时间chao过太久。

解jueban法:请控zhi反应时间。

d.原因:酶标记物污染了簒in谄渌黶hi剂。

解jueban法:使用过的吸头应立即丢弃,kebimianshi剂间相互污染,凡是shi剂(tebie是酶标记物与底物溶液)接触过的rongqi应立即清洗干净。(先以漂白shui浸泡,再以清shui冲洗干净,ke确保无残留)

4. 阴性标zhun品的吸guang值低yu阳性标zhun品的吸guang值。

a.原因:微孔中的shi剂未能chong分hun簒iⅫ/span>

解jueban法: shi剂jia完hou,需轻敲pan四周使其chong分hun合均匀。

b.原因:洗板过程发生wen题(tong2-f.)

解jueban法:请can考2-f.

c.原因:添jiayang品huo酶标记物的liang不yizhi。

解jueban法: 请can考2-d.

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