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人肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒

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荣一登录ming称: 人肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒
荣一登录型号: TNFSF14
荣一登录展商: ELISA试剂盒
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人肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒  的详xi介绍


肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒

使yong说明shu

肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒基本原理:

本试剂盒采yong双荣一登耲i行腅LISAfa。觤ei谷薚NFSF14荣一登录包被于酶标板上,实验时样品huo标准品中的人TNFSF14与包被荣一登录结合,you离的cheng分被洗去。依次加入生物素化的抗人TNFSF14荣一登录he纀ei趸锩副阩i的qinhe素。抗人TNFSF14荣一登录与结合在包被荣一登录上的人TNFSF14结合、生物素与qinhe素te异性结合而xingcheng**fu合物,you离的cheng分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在纀ei趸锩傅腸ui化下呈现lan色,加终止液houbiancheng黄色。yong酶标仪在450nm波长处测OD值,人TNFSF14浓度与OD450值之间硈hou齜i,tong过绘制标譲i呒扑愠鲅分腥薚NFSF14的浓度。

肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒miao述:

英文ming称 Human TNFSF14 (Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily, Member 14)ELISA Kit
謝ing膍ing称 人肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)酶联**吸附测定试剂盒
货号 X-EL-H0095c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测fangfa 双荣一登耲i行膄a
检测fan围 31.25~2000pg/mL ling敏度 18.75pg/mL

试剂盒zucheng:

謝ing膍ing称

英文ming称

规格

bao存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓suo生物素化荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化荣一登录稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓suoHRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓suo洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物rong液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣一登录说明shu

Product  Description

  1 

 

质检报gao

Certificate of Analysis

  1 

 

te别说明
*: [96T/48T](da开包zhuanghouqing及时检查所觴ing锲肥欠衿雚uan完整)
#: 一周na使觤ei纱嬗冱/span>4℃,需长时间存放huo多次使yong建议存于-20.                                      

肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒检测前准bei工zuo:

1. qingti前20分zhong从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

2. 将浓suo洗祔ou簓ong双蒸水稀释(1:25)。未yong完的放回4℃。从冰箱中取出的浓suo洗祔ou嚎赡苡薪峋В粲谡齝hang现xiang,可yong40℃水浴wei加re使结晶完quanrong解hou再配制洗祔ou海觬e温度bu要超过50℃,使yong时洗祔ou河ξ椅拢5bi帐箉ong。

3. 标准品10000×g离心1分zhong,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,xuan紧管盖,静置10分zhong,上下颠倒数次,待其充分rong解hou,yong移液qi将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然hou根据需要进行beibi稀释(注:bu要直接在反应孔中进行beibi稀释)。建议配制cheng以下浓度:按照稀蕋ou絝a图例 标准品&样品稀释液直接zuo为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。 

4. 生物素化荣一登录工zuo液:实验前计算当次实验所需yong量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使yong前15分zhong,以生物素化荣一登录稀释液稀释浓suo生物素化荣一登录(1:100)cheng工zuo浓度。礲i帐箉ong。

5. 酶结合物工zuo液:实验前计算当次实验所需yong量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使yong前15分zhong,以酶结合物稀释液稀释浓suoHRP酶结合物(1:100)cheng工zuo浓度。

礲i帐箉ong。

肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒标准品稀蕋ou絝a图例:(以500μL/管为例,也可根据实际yong量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准品huo样品各100μL 37℃孵yu90分zhong

2. 加入100μ生物素化荣一登录工zuo液,37℃孵yu60分zhong

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结合物工zuo液, 37℃孵yu30分zhong

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物rong液, 37℃孵yu15分zhongzuoyou

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD

8. 结果计算

一、caozuo因素对ELISA结果的yingxiangELISAcaozuo步骤fu杂,caozuobu当将引起较大的误差。以下xu述各个步骤中的yingxiang因素。

1.加样

2.温yu

3.洗涤

4.显色

5.bi色

二、灰区的she置tongchang情况下,ELISA定性实验以“阳性”he“阴性”来报gao结果,liang者间有一tiao分界线被称为“阳性判断值ao?/span>cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报gao的依据。

san、标本fu查ELISA手工检测过程fu杂,yingxiang因素较多,即使室na质kong在kong,也可能因孔间差异而造cheng结果的差异,因此加大fu查力度是bao证结果准确性的可靠fangfa,bi如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可yi、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行fu查。

四、结果判断he报gaochangyong下列几謟hi絝a表shi结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一般以滴度表shi。

3.定量测定 即yong已知量的标准品zuo一系列稀释hou进行ELISA测定,绘制标譲i撸峁杂帕剂縣uo单位表shi。在ELISA定量检测中mei一块反应板都必须绘制相应的标譲i摺Ⅻ/span>

注意shi项:

zixi阅读说明shu。

检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期,qing勿使yong。

按说明shu萬anㄋ惺约疗雚uan(数量、体积)。

标本制bei要规fan,mei份标本体积要按2-3个fu孔以上的量制bei(贮存),尽量分zhuang做bei份。duan期na无fa实验者,注意低温bao存。

准bei好所有实验额外所需物品,(bi如移液qi,试管,清洗qi,酶标仪)。

按说明shu将所yong试剂平衡至室温,根据检测标本数量萬anㄋ枋约恋牧俊Ⅻ/span>

检查试剂盒namei种试剂的贮存tiao件,bao证所有试剂jun按照试剂盒na说明shu推荐的tiao件存储。

检查buwen定huo者bian质的试剂rong液(bi如沉淀huobian色)。有些试剂,bi如标准品稀释液huo者检测稀释液,可能在she计时jiu含有沉淀物。所有试剂在祑en朊副臧逯埃匦璩浞只煸取6捎诔恋砦锏膖e性,在加入酶标板之前,必需bu停搅拌。

bao证充分的孵yu时间he温度。

莤ing鹗箉ongbu同生产批号的试剂取dai蟴hong惺约羑uo混合蟴hong惺约痢Ⅻ/span>

在混合huorong解蛋白rong液蔮ao躮ian泡沫产生。

在实验开始之前,癱ai藕檬笛榱鞒獭Ⅻ/span>

在实验开始之前,清jie工zuo台。

若觴ing侍猓τ雡o公薺ing騞ai理商的jishu支持联系

肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒结果判断:

1. mei个标准品的OD值减去空白孔的OD值houzuo图,如she置fu孔,则应取其平jun值计算。以标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标譲i摺R嗫梢狱/span>OD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标譲i摺Ⅻ/span>

2. 推荐使yong专业的曲线制zuo软件,如curve expert 1.3huo1.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标譲i卟槌鱿嘤Φ呐ǘ龋艘韵∈蚥ei数;亦可将样品的OD值dai入标譲i叩哪夂蟜ang程式,计算出样品浓度,再乘以稀释bei数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标譲i呱舷蓿κ实毕∈蚳ou重测,计算浓度时应乘以稀释bei数。 

肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒有效期wen定性考cha

本试验以肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)为例

1.  OD值:

正changbao存tiao件下有效期nahe超过有效期2个月所测OD值bi较

正chang有效期naOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shoulv:分别于定值xue清及xuejiang中加入一定量的肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)标准品,重fu测定并计算其品jun值,回shoulv为测定值与理lun值的bilv。

        正changbao存tiao件下有效期nahe过有效期2个月elisa 试剂盒回shoulv检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值xue清及xuejiang中加入一定量的肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)标准品,并将标本按1:2,1:4,1:8稀释,线性fan围即为稀释hou样本中肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)含量的测定值与理lun值的bilv。

         正changbao存tiao件下有效期nahe过有效期2个月elisa 试剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样品测定值的bian异系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批na差:取同一批次试剂盒对低值,中值he高值样本进行定量检测,mei份样本测定20次,分别计算bu同浓度样本的平jun值heSD值。

批间差:xuan取 3 个bu同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定, mei个样本使yong同一试剂盒重fu测定 8 次,分别计算bu同浓度样本的平jun值及 SD 值。(批na差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正changbao存tiao件下有效期nahe过有效期2个月elisa 试剂盒回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

肿瘤坏死因子配体超家族cheng员14(TNFSF14)试剂盒会出现的问题及解决办fa:

1. 加入反应终止液hou,没觴ing庵礹uo吸光值pian低。

a.原因:未加入酶标ji物。

解决办fa:qing按照caozuo步骤进行。

b.原因:试剂盒na容物未能充分回。

解决办fa:萬anㄊ约梁衝a容物回温hou再进行caozuo。

c.原因:室温太低。

解决办fa:若室温太低(<19),qing于caozuo步骤4,适当延长温yu时间。

d.原因:未使yong试剂盒的清洗液清洗。

解决办fa: qingyong试剂盒na所ti供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过有效期限。

解决办fa:qing更换cheng仍在有效期限na的试剂盒。

2. 标譲i呦咝詁ujia,huo是平行性bu好。

a.原因:温yu位置避光bu好huoshou到气流干扰。

解决办fa: qing确认温yu位置既bu透光也bu透风(如抽屉na)

b.原因:caozuo时间拖太久。

解决办fa:qing在fangfashu练hou再进行caozuo。

c.原因:wei孔间相互污ran。

解决办fa: 加样品蔮ao琿ing小心勿溅出wei孔外,以mian造cheng其它wei孔的污ran。

d.原因:标准品huo酶标ji物所加入的量bu一zhi。

解决办fa:qing使yong已校正过的移液qiang,并确bao其与吸tou之间有高度密合性。

e.原因:添加样品huo试剂的caozuofangfabu正确。

解决办fa:加样品huo试剂蔮ao黷ouqing勿接触wei孔。

f.原因:洗板过程发生问题(如管耭an氯⑾赐臧録ou未立刻进行下一步骤)

解决办fa:qing随时jiankong洗板机洗板过程,洗完hou立即进行下一步骤。

3. 吸光值junpian高(huo线性bu够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办fa: 若无fa降低室na温度,qing适当suoduan步骤4的温yu时间。

b.原因:底物rong液shou到污ran。

解决办fa: 若发现底物rong液已呈现淡lan色,qingbu要再使yong。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办fa:qingkong制反应时间。

d.原因:酶标ji物污ran了盒na其它试剂。

解决办fa:使yong过的吸tou应立即丢qi,可避mian试剂间相互污ran,凡是试剂(te别是酶标ji物与底物rong液)接触过的容qi应立即清洗干jing。(先以piao白水浸泡,再以清水冲洗干jing,可确bao无can留)

4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因:wei孔中的试剂未能充分混合。

解决办fa: 试剂加完hou,需轻敲盘四周使其充分混合jun匀。

b.原因:洗板过程发生问题(2-f.)

解决办fa:qing参考2-f.

c.原因:添加样品huo酶标ji物的量bu一zhi。

解决办fa: qing参考2-d.

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