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人shi铬蛋白B(CHGB)试jihe

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荣一登录ming称: 人shi铬蛋白B(CHGB)试jihe
荣一登录型号: CHGB
荣一登录展shang: ELISA试jihe
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简单介绍

金钻世界


人shi铬蛋白B(CHGB)试jihe  的详细介绍


shi铬蛋白B(CHGB)试jihe

使用shuoming书

shi铬蛋白B(CHGB)试jihe基benyuan理:

ben试jihe采用双荣一登录夹心ELISA法。觤ei谷薈HGB荣一登录包bei于酶标ban上,实验时样品huo标准品zhong的人CHGB与包bei荣一登录结合,游离的成分bei洗qu。依次加入生物素化的抗人CHGB荣一登录和辣根过氧化物酶标ji的qin和素。抗人CHGB荣一登录与结合zai包bei荣一登录蓌i娜薈HGB结合、生物素与qin和素特异xing结合而形成**复合物,游离的成分bei洗qu。加入显色底物(TMB),TMBzai辣根过氧化物酶的cui化下呈现蓝色,加终止ye后变成黄色。用酶标仪zai450nm波长处ceOD值,人CHGB浓度与OD450值之间呈正比,tong过绘制标准qu线计suan出样品zhong人CHGB的浓度。

shi铬蛋白B(CHGB)试jihe描述:

英文ming称 Human CHGB (Chromogranin B) ELISA Kit
zhong文ming称 人shi铬蛋白B(CHGB)酶联**吸附ceding试jihe
货号 X-EL-H0832c 种属 Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双荣一登录夹心法
检ce范wei 62.5~4000pg/mL 灵敏度 37.5pg/mL

试jihezu成:

zhong文ming称

英文ming称

规ge

保cun

  ELISA酶标ban(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化荣一登录稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗diye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(bi光)

反ying终止ye

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封banfu膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣一登录shuoming书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuoming
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查suo有物品是否qi全完整)
#: 一zhou内使用kecun于4℃,xu长时间cun放huoduo磜en褂媒▂icun于-20.                                      

shi铬蛋白B(CHGB)试jihe检ce前准备gong作:

1. 请ti前20分zhong从冰xiangzhong取出试jihe,ping衡至室蝜ongⅫ/span>

2. 将浓缩洗diye用双蒸shui稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰xiangzhong取出的浓缩洗diyeke能有结晶,属于正常现象,ke用40℃shui浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗diye(加热温度不yao超过50℃,使用时洗diyeying为室温)。dang日使用。

3. 标准品10000×g离心1分zhong,加入标准品&样品稀释ye1.0mL至冻干标准品zhong,旋紧管盖,静zhi10分zhong,上下颠dao数次,待其chong分溶解后,用移ye器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据xuyaojin行倍比稀释(zhu:不yaozhi接zai反yingkongzhongjin行倍比稀释)。建yi配制成以下浓度:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释yezhi接作为空白kong0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入han有0.5mL标准品&样品稀释ye的EP管zhong,混匀即ke,其余浓度依磗i嗤啤Ⅻ/span> 

4. 生物素化荣一登录gong作ye:实验前计suandang磜en笛閟uoxu用量(以100μL/kong计),实际配制时yingduo配制100-200μL。使用前15分zhong,以生物素化荣一登录稀释ye稀释浓缩生物素化荣一登录(1:100)成gong作浓度。dang日使用。

5. 酶结合物gong作ye:实验前计suandang磜en笛閟uoxu用量(以100μL/kong计),实际配制时yingduo配制100-200μL。使用前15分zhong,以酶结合物稀释ye稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成gong作浓度。

dang日使用。

shi铬蛋白B(CHGB)试jihe标准品稀释方法图例aiㄒ狱/span>500μL/管为例,也ke根据实际用量来稀释,如200μL/管)

            

1. zai各kongzhong加入标准品huo样品各100μL 37℃孵育90分zhong

2. 加入100μ生物素化荣一登录gong作ye,37℃孵育60分zhong

3. 洗di3

4. 加入100μL酶结合物gong作ye, 37℃孵育30分zhong

5. 洗di5

6. 加入90μL底物溶ye, 37℃孵育15分zhong左右

7. 加入50μL终止ye,立即zai450nm波长处ce量OD

8. 结果计suan

一、操作因素对ELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作不dang将yin起jiao大的误差。以下叙述各个步骤zhong的影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗di

4.显色

5.比色

er、灰区的设zhitong常情况下,ELISAdingxing实验以“阳xing”和“yinxing”来报告结果,两zhe间有一条分jie线bei称为“阳xing判断值”(cut-off valueCO值),这是dingxing**ceding结果报告的依据。

三、标ben复查ELISA手gong检ce过cheng复杂,影响因素jiaoduo,即使室内质控zai控,也ke能因kong间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保zheng结果准确xing的ke靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的ke疑、弱阳xing标ben及少见模式的检ce结果jin行复查。

四、结果判断和报告常用下列几种方法表shi结果:

1.dingxingceding

2.半ding量ceding 结果襤ua阋詃i度表shi。

3.ding量ceding 即用已zhi量的标准品作一xi列稀释后jin行ELISAceding,绘制标准qu线,结果以优羓i縣uo单位表shi。zaiELISAding量检cezhongmei一块反yingban都必须绘制xiangying的标准qu线。

zhu意事项:

zi细阅读shuoming书。

检查试jihe标签蓌i挠行凇H绻行冢胛鹗褂谩Ⅻ/span>

按shuoming书确dingsuo有试jiqi全(数量、体积)。

标ben制备yao规范,mei份标ben体积yao按2-3个复kong以蓌i牧恐票福ㄖ點un),尽量穤hong白霰阜荨6唐谀谖薹ㄊ笛閦he,zhu意低温保cun。

准备好suo有实验e外suoxu物品,(比如移ye器,试管,清洗器,酶标仪)。

按shuoming书将suo用试jiping衡至室温,根据检ce标ben数量确dingsuoxu试ji的量。

检查试jihe内mei种试ji的贮cun条件,保zhengsuo有试ji均按照试jihe内shuoming书推荐的条件cun储。

检查不wendinghuozhe变质的试ji溶ye(比如沉dianhuo变色)。有些试ji,比如标准品稀释yehuozhe检ce稀释ye,ke能zai设计蔮en蚳an有沉dian物。suo有试jizaidi入酶标ban之前,必xuchong分混匀。而由于沉dian物的特xing,zai加入酶标ban之前,必xu不停搅拌。

保zhengchong分的孵育时间和温度。

切勿使用不同生产批号的试ji取代蟴hong惺詊ihuo混合蟴hong惺詊i。

zai混合huo溶解蛋白溶ye时,bi免泡沫产生。

zai实验开始之前,安pai好实验流cheng。

zai实验开始之前,清jiegong作台。

若有wen题,ying与wogong司huo代理shang的技术支持联xi

shi铬蛋白B(CHGB)试jihe结果判断:

1. mei个标准品的OD值减qu空白kong的OD值后作图,如设zhi复kong,则ying取其ping均值计suan。以标准品的浓度为横坐标,OD謉i葑辏娉霰曜紂u线。亦ke以OD謉i嶙辏曜计返呐ǘ任葑辏娉霰曜紂u线。

2. 推荐使用专ye的qu线制作软件,如curve expert 1.3huo1.4,zai软件jie面既ke根据样品OD值,由标准qu线查出xiangying的浓度,乘以稀释倍数;亦ke将样品的OD值代入标准qu线的拟合方cheng式,计suan出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准qu线上xian,yingshidang稀释后重ce,计suan浓度时ying乘以稀释倍数。 

shi铬蛋白B(CHGB)试jihe有效期wendingxing考察

ben试验以shi铬蛋白B(CHGB)为例

1.  OD值:

正常保cun条件下有效期内和超过有效期2个月suoceOD謉ang萰iao

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:穤hi鹩赿ing值xue清及xue浆zhong加入一ding量的shi铬蛋白B(CHGB)标准品,重复ceding并计suan其品均值,回收率为ceding謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻ/span>

        正常保cun条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试jihe回收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线xing:穤hi鹩赿ing值xue清及xue浆zhong加入一ding量的shi铬蛋白B(CHGB)标准品,并将标ben按1:2,1:4,1:8稀释,线xing范wei即为稀释后样benzhongshi铬蛋白B(CHGB)han量的ceding謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻ/span>

         正常保cun条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试jihe回线xing检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样品ceding值的变异xi数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批磜en詊ihe对低值,zhong值和高值样benjin行ding量检ce,mei份样benceding20次,穤hi鸺苨uan不同浓度样ben的ping均值和SD值。

批间差:选取 3 个不同批次的试jihe穤hi鸲缘汀hong、高值ding值样benjin行ding量ceding, mei个样ben使用同一试jihe重复ceding 8 次,穤hi鸺苨uan不同浓度样ben的ping均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保cun条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试jihe回精密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

shi铬蛋白B(CHGB)试jihehui出现的wen题及解决办法:

1. 加入反ying终止ye后,没有吸光值huo吸光值pian低。

a.yuan因:未加入酶标ji物。

解决办法:请按照操作步骤jin行。

b.yuan因:试jihe内容物未能chong分回。

解决办法:确ding试jihe内容物回温后再jin行操作。

c.yuan因:室温tai低。

解决办法:若室温tai低(<19),请于操作步骤4,shidang延长温育时间。

d.yuan因:未使用试jihe的清洗ye清洗。

解决办法: 请用试jihe内suotigong的清洗ye清洗。

e.yuan因:试jihe已过有效期xian。

解决办法:请更换成仍zai有效期xian内的试jihe。

2. 标准qu线线xing不佳,huo是ping行xing不好。

a.yuan因:温育位zhibi光不好huo受到qi流干扰。

解决办法: 请确认温育位zhi既不透光也不透风(如chou屉内)

b.yuan因:操作时间拖tai久。

解决办法:请zai方法熟练后再jin行操作。

c.yuan因:微kong间xianghuwu染。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅出微kong外,以免造成其ta微kong的wu染。

d.yuan因:标准品huo酶标ji物suo加入的量不一zhi。

解决办法:请使用已校正过的移ye枪,并确保其与吸头之间有高度密合xing。

e.yuan因:添加样品huo试ji的操作方法不正确。

解决办法:加样品huo试ji时,吸头请勿接触微kong。

f.yuan因:洗ban过cheng发生wen题(如管路堵sai、洗完ban后未立刻jin行下一步骤)

解决办法:请随时监控洗ban机洗ban过cheng,洗完后立即jin行下一步骤。

3. 吸光值均pian高(huo线xing不筯uan伏/span>)

a.yuan因:室温tai高(>25)

解决办法: 若无法降低室内温度,请shidang缩短步骤4的温育时间。

b.yuan因:底物溶ye受到wu染。

解决办法: 若发现底物溶ye已呈现淡蓝色,请不yao再使用。

c.yuan因:反ying时间超过tai久。

解决办法:请控制反ying时间。

d.yuan因:酶标ji物wu染了he内其ta试ji。

解决办法:使用过的吸头ying立即丢弃,kebi免试ji间xianghuwu染,凡是试ji(特别是酶标ji物与底物溶ye)接触过的容器ying立即清洗干净。(xian以piao白shui浸泡,再以清shui冲洗干净,ke确保无残留)

4. yinxing标准品的吸光值低于阳xing标准品的吸光值。

a.yuan因:微kongzhong的试ji未能chong分混合。

解决办法: 试ji加完后,xu轻敲盘四zhou使其chong分混合均匀。

b.yuan因:洗ban过cheng发生wen题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.yuan因:添加样品huo酶标ji物的量不一zhi。

解决办法: 请参考2-d.

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