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人巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒

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荣yi登录名称: 人巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒
荣yi登录xing号: MCSF
荣yi登录展商: ELISAshi剂盒
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人巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒  的详xi介shao


巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒

使用说明书

巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒基本原理:

本shi剂盒采用shuang荣yi登录夹xinELISAfa。用抗人MCSF荣yi登录bao被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人MCSF与bao被荣yi登录结he,游离的成分被洗去。yici加入sheng物素化祄u谷薓CSF荣yi登录和纀ei趸锩副昙堑那缀退亍?谷薓CSF荣yi登录与结he在bao被荣yi登录上的人MCSF结he、sheng物素与亲和素特异性结he而xing成**复he物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在纀ei趸锩傅拇呋鲁氏掷渡觶hong止ye后bian成黄色。用酶标仪在450nm波长处测ODzhi,人MCSF浓度与OD450zhi之间硈hou齜i,通过绘制标准曲线计算出样品中人MCSF的浓度。

巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒描shu:

英文名称 Human MCSF (Macrophage Colony Stimulating Factor 1) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 人巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)酶联**吸附测定shi剂盒
货号 X-EL-H0097c 种属 Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方fa shuang荣yi登录夹xinfa
检测范围 31.25~2000pg/mL 灵敏度 18.75pg/mL

shi剂盒组成:

謝ing拿劈/span>

英文名称

规ge

bao存

  ELISA酶标板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻gan标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀shiye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物素化荣yi登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化荣yi登录稀shiye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结he物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结he物稀shiye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤ye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应zhong止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣yi登录说明书

Product  Description

  1 

 

质检报gao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开bao装后qingji时检查所觴ing锲肥欠駋i全完整)
#: yi周内使用ke存于4℃,需长时间存放或多ci使用建议存于-20.                                      

巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒检测qian准bei工作:

1. qingtiqian20分钟从冰箱中取出shi剂盒,平衡至室温。

2. jiang浓缩洗涤ye用shuang蒸水稀shi(1:25)。wei用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤yeke能有结晶,属于正常现象,ke用40℃水yuwei加热使结晶完全溶解后再配制洗涤ye(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤ye应为室温)。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

3. 标准品10000×g离xin1分钟,加入标准品&样品稀shiye1.0mL至冻gan标准品中,旋jinguan盖,静置10分钟,上下dian倒数ci,待其充分溶解后,用yiye器jiang其轻轻混yun(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进xing倍bi稀shi(注:不要直jie在反应孔中进xing倍bi稀shi)。建议配制成以下浓度:按照稀shi方fa图例 标准品&样品稀shiye直jie作为kong白孔0ng/mL。ru配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上shu标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀shiye的EPguan中,混yun即ke,其余浓度yi此类推。 

4. sheng物素化荣yi登录工作ye:实验qian计算当ci实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用qian15分钟,以sheng物素化荣yi登录稀shiye稀shi浓缩sheng物素化荣yi登录(1:100)成工作浓度。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

5. 酶结he物工作ye:实验qian计算当ci实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用qian15分钟,以酶结he物稀shiye稀shi浓缩HRP酶结he物(1:100)成工作浓度。

礲i帐褂谩Ⅻ/span>

巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒标准品稀shi方fa图例:(以500μL/guan为例,也ke根据实际用量来稀shi,ru200μL/guan)

            

1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μsheng物素化荣yi登录工作ye,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3ci

4. 加入100μL酶结he物工作ye, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5ci

6. 加入90μL底物溶ye, 37℃孵育15分钟zuo右

7. 加入50μLzhong止ye,li即在450nm波长处测量ODzhi

8. 结果计算

yi、cao作因素对ELISA结果的影响ELISAcao作步zhou复杂,cao作瞙uai眏iang引qi较大的wu差。以下叙shu各个步zhou中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.bi色

er、灰区的she置通常情况下,ELISA定性实验襶u把粜yu焙汀耙跣yu崩幢╣ao结果,两者间有yi条分界线被称为“阳性判断zhiao?/span>cut-off valueCOzhi),zhe是定性**测定结果报gao的yi据。

三、标本复查ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也ke能因孔间差异而zao成结果的差异,因此加大复查力度是bao证结果准确性的ke靠方fa,biru对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项mu的ke疑、弱阳性标本jishao见模式的检测结果进xing复查。

四、结果判断和报gao常用下列几謟hi絝abiao示结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果yiban以滴度biao示。

3.定量测定 即用已zhi量的标准品作yi系列稀shi后进xingELISA测定,绘制标准曲线,结果以优良量或单位biao示。在ELISA定量检测中每yikuai反应板都必须绘制相应的标准曲线。

注意事项:

仔xi阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检查shi剂盒标签上的觴ingi。ru果超过觴ingi,qing勿使用。

按说明书确定所有shi剂qi全(数量、体积)。

标本制bei要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制bei(贮存),尽量分装zuobei份。短qi内无fa实验者,注意di温bao存。

准beihao所有实验额外所需物品,(biruyiye器,shiguan,qing洗器,酶标仪)。

按说明书jiang所用shi剂平衡至室温,根据检测标本数量确定所需shi剂的量。

检查shi剂簒in诿恐謘hi剂的贮存条件,bao证所有shi剂均按照shi剂簒in谒得魇橥萍龅奶跫鎐hu。

检查不稳定或者bian质的shi剂溶ye(biruchen淀或bian色)。觴ing﹕hi糽i琤iru标准品稀shiye或者检测稀shiye,ke能在she计时就含有chen淀物。所有shi剂在滴入酶标板之qian,必需充分混yun。而由于chen淀物的特性,在加入酶标板之qian,必需不停搅ban。

bao证充穤hi姆跤奔浜臀露取Ⅻ/span>

莤ing鹗褂貌煌瑂hengchanpi号的shi剂取dai现有shi剂或混he现有shi剂。

在混he或溶解蛋白溶ye蔮ao苊馀輒ochansheng。

在实验开始之qian,安排hao实验流程。

在实验开始之qian,qing洁工作台。

若觴ing侍猓τ雡o公司或dai理商的技shu支持联系

巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒结果判断:

1. 每个标准品的ODzhi减去kong白孔的ODzhi后作图,rushe置复孔,则应取其平均zhi计算。以标准品的浓度为横坐标,ODzhi为纵坐标,绘出标准曲线。亦ke以ODzhi为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件,rucurve expert 1.31.4,在软件界mian既ke根据样品ODzhi,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀shi倍数;亦kejiang样品的ODzhidai入标准曲线的nihe方程式,计算出样品浓度,再乘以稀shi倍数,糲i返氖导逝ǘ取Ⅻ/span>

3. 若样品ODzhigao于标准曲线上限,应适当稀shi后重测,计算浓度时应乘以稀shi倍数。 

巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒觴ingi稳定性考cha

本shi验以巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)为例

1.  ODzhi:

正常bao存条件下觴ingi内和超过觴ingi2个月所测ODzhibi较

正常觴ingi内ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月觴ingiODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:分别于定zhi血qingji血浆中加入yi定量的巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)标准品,重复测定并计算其品均zhi,回shou率为测定zhi与理论zhi的bi率。

        正常bao存条件下觴ingi内和过觴ingi2个月elisa shi剂盒回shou率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定zhi血qingji血浆中加入yi定量的巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)标准品,并jiang标本按1:2,1:4,1:8稀shi,线性范围糲ihi后样本中巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)含量的测定zhi与理论zhi的bi率。

         正常bao存条件下觴ingi内和过觴ingi2个月elisa shi剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精mi度:以样品测定zhi的bian异系数CVbiao示。CV%=SD/meanx100

pi内差:取同yipicishi剂盒对dizhi,中zhi和gaozhi样本进xing定量检测,每份样本测定20ci,分别计算不同浓度样本的平均zhi和SDzhi。

pi间差:选取 3 个不同pici的shi剂盒分别对di、中、gaozhi定zhi样本进xing定量测定, 每个样本使用同yishi剂盒重复测定 8 ci,分别计算不同浓度样本的平均zhiji SD zhi。(pi内差: CV<10%;pi间差: CV<11%)

       正常bao存条件下觴ingi内和过觴ingi2个月elisa shi剂盒回精mi度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

巨shixi胞集落刺ji因子(MCSF)shi剂盒会出蟴hi奈侍鈐i解决办fa:

1. 加入反应zhong止ye后,没觴ing鈠hi或吸光zhipiandi。

a.原因:wei加入酶标记物。

解决办fa:qing按照cao作步zhou进xing。

b.原因:shi剂簒in趓ong物wei能充分回。

解决办fa:确定shi剂簒in趓ong物回温后再进xingcao作。

c.原因:室温太di。

解决办fa:若室温太di(<19),qing于cao作步zhou4,适当延长温育时间。

d.原因:wei使用shi剂盒的qing洗yeqing洗。

解决办fa: qing用shi剂簒in谒鵷i供的qing洗yeqing洗。

e.原因:shi剂盒已过觴ingi限。

解决办fa:qinggenghuan成reng在觴ingi限内的shi剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或是平xing性不hao。

a.原因:温育位置避光不hao或shou到气流gan扰。

解决办fa: qing确认温育位置既不tou光也不tou风(ru抽屉内)

b.原因:cao作时间拖太久。

解决办fa:qing在方fa熟练后再进xingcao作。

c.原因:wei孔间相hu污染。

解决办fa: 加样品蔮ao琿ing小xin勿jian出wei孔外,以免zao成其它wei孔的污染。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不yi致。

解决办fa:qing使用已校正过的yiye枪,并确bao其与吸头之间有gao度mihe衴uⅫ/span>

e.原因:tian加样品或shi剂的cao作方fa不正确。

解决办fa:加样品或shi剂蔮ao穛ing勿jie触wei孔。

f.原因e窗骞谭heng问题(ruguanlu堵sai、洗完板后weili刻进xing下yi步zhou)

解决办fa:qing随时监控洗板机洗板过程,洗完后li即进xing下yi步zhou。

3. 吸光zhi均piangao(或线性不筯uan伏/span>)

a.原因:室温太gao(>25)

解决办fa: 若无fa降di室内温度,qing适当缩短步zhou4的温育时间。

b.原因:底物溶yeshou到污染。

解决办fa: 若发蟴hi孜锶躽e已呈蟴hi渡琿ing不要再使用。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办fa:qing控制反应时间。

d.原因ao副昙俏镂廴緇iao簒in谄渌黶hi剂。

解决办fa:使用过的吸头应li即ding弃,ke避免shi剂间相hu污染,凡是shi剂(特别蕅iao副昙俏镉氲孜锶躽e)jie触过的rong器应li即qing洗gan净。(先以漂白水浸泡,再以qing水冲洗gan净,ke确bao无残留)

4. 阴性标准品的吸光zhidi于阳性标准品的吸光zhi。

a.原因:wei孔中的shi剂wei能充分混he。

解决办fa: shi剂加完后,需轻qiao盘四周使其充分混he均yun。

b.原因e窗骞谭heng问题(2-f.)

解决办fa:qing参考2-f.

c.原因:tian加样品或酶标记物的量不yi致。

解决办fa: qing参考2-d.

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