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人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒

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荣一登录名称: 人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒
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人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒  de详细介shao


人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒

使用说明书

人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒基本yuan理:

本试ji盒采用shuang荣一登录jia心ELISA法。用kang人CLDN5荣一登录包被于酶标板上,实验shi样品或标准品中de人CLDN5与包被荣一登录结合,游离de成分被洗去。依次加入生物素化dekang人CLDN5荣一登录he辣根过氧化物酶标记de亲he素。kang人CLDN5荣一登录与结合zai包被荣一登录上de人CLDN5结簒i⑸锼赜肭議e素特异性结合er形成**复合物,游离de成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMBzai辣根过氧化物酶de催化下呈xian蓝色,加终zhi液后变成黄色。用酶标仪zai450nm波长处测OD值,人CLDN5浓度与OD450值之jian呈正bi,通过绘制标准曲xian计算出样品中人CLDN5de浓度。

人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒描述:

英文名称 Human CLDN5 (Claudin 5) ELISA Kit
中文名称 人封bi蛋白5(CLDN5)酶联**吸附测定试ji盒
货号 X-EL-H1630c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuang荣一登录jia心法
检测范围 0.156~10ng/mL ling敏度 0.094ng/mL

试ji盒组成:

中文名称

英文名称

规格

保cun

  ELISA酶标板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化荣一登录xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物xi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终zhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣一登录说明书

Product  Description

  1 

 

謘hi毂ǜ妩/span>

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后qing及shi检查suo有物品是否齐全完整)
#: 
一周内使用kecun于4℃,需长shijiancun放或多次使用建议cun于-20.                                      

人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒检测前准备工作:

1. qingti前20分钟从冰箱中取出试ji盒,平衡zhi室温。

2. 将浓缩洗涤液用shuang蒸水xi释(1:25)。wei用完de放回4℃。从冰箱中取出de浓缩洗涤液keneng有结晶,属于正常xian象,ke用40℃水浴微加热使结晶完全溶jie后zai配制洗涤液(加热温度不yao超过50℃,使用shi洗涤液应wei室温)。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

3. 标准品10000×g离心1分钟,加入标准品&样品xi释液1.0mLzhidong干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其chong分溶jie后,用移液器将其轻轻hun匀(浓度wei8000pg/mL)。然后根ju需yao进行beibixi释(注:不yao直jiezai反应孔中进行beibixi释)。建议配制成以下浓度:anzhaoxi释方法图例 标准品&样品xi释液直jie作wei空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mLde上述标准品加入han有0.5mL标准品&样品xi释液deEP管中,hun匀即ke,其余浓度依磗i嗤啤Ⅻ/span> 

4. 生物素化荣一登录工作液:实验前计算当次实验suo需用量(以100μL/孔计),实际配制shi应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化荣一登录xi释液xi释浓缩生物素化荣一登录(1:100)成工作浓度。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验suo需用量(以100μL/孔计),实际配制shi应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物xi释液xi释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

礲i帐褂谩Ⅻ/span>

人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒标准品xi释方法图例:(以500μL/管wei例,yeke根ju实际用量来xi释,如200μL/管)

            

1. zai各孔中加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生物素化荣一登录工作液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结合物工作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终zhi液,li即zai450nm波长处测量OD

8. 结guo计算

一、操作因素duiELISA结guodeying响ELISA操作步zhou复杂,操作不当将yinqi较dadewu差。以下叙述各ge步zhou中deying响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.bi色

er、灰区de设置通常qingkuang下,ELISA定性实验以“阳性”he“阴性”来报告结guo,两zhejian有一tiao分jiexian被称wei“阳性判秞ian怠保?/span>cut-off valueCO值),zhe是定性**测定结guo报告de依ju。

三、标本复查ELISA蕑hiぜ觳夤谈丛樱瑈ing响因素较多,即使室内质控zai控,yekeneng因孔jian差异er造成结guode差异,因ci加da复查力度是保证结guo譲i沸詃eke靠方法,bi如duiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdengxiang目deke疑、ruo阳性标本及少见模式de检测结guo进行复查。

四、结guo判断he报告常用下列几謟hi椒ū硎窘醙uo:

1.定性测定

2.半定量测定 结guo一般以滴度表示。

3.定量测定 即用已zhi量de标准品作一系列xi释后进行ELISA测定,绘制标准曲xian,结guo以优羓i炕虻ノ槐硎尽aiELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应de标准曲xian。

注意事xiang:

仔细阅读说明书。

检查试ji盒标签上de有效qi。如guo超过有效qi,qing勿使用。

an说明书确定suo有试ji齐全(数量、体ji)。

标本制备yao规范,每份标本体jiyaoan2-3ge复孔以上de量制备(贮cun),尽量分装做备份。duanqi内无法实验zhe,注意低温保cun。

准备haosuo有实验额waisuo需物品,(bi如移液器,试管,qing洗器,酶标仪)。

an说明书将suo用试ji平衡zhi室温,根ju检测标本数量确定suo需试jide量。

检查试ji盒内每种试jide贮cuntiao件,保证suo有试ji均anzhao试ji盒内说明书推荐detiao件cun储。

检查不稳定或zhe变质de试ji溶液(bi如沉dian或变色)。有些试ji,bi如标准品xi释液或zhe检测xi释液,kenengzai设计shijiuhan有沉dian物。suo有试jizai滴入酶标板之前,必需chong分hun匀。er由于沉dian物de特性,zai加入酶标板之前,必需不停搅ban。

保证chong分de孵育shijianhe温度。

切勿使用不同生产批号de试ji取daixian有试ji或hun合xian有试ji。

zaihun合或溶jie蛋白溶液shi,避mian泡沫产生。

zai实验开shi之前,an排hao实验liu程。

zai实验开shi之前,qing洁工作台。

ruo有问题,应与我公司或dai理商de技术支硓hi袋/span>

人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒结guo判断:

1. 每ge标准品deOD值减去空白孔deOD值后作图,如设置复孔,则应取其平均值计算。以标准品de浓度wei横坐标,OD值wei纵坐标,绘出标准曲xian。亦ke以OD值wei横坐标,标准品de浓度wei纵坐标,绘出标准曲xian。

2. 推荐使用专业de曲xian制作软件,如curve expert 1.31.4,zai软件jie面jike根ju样品OD值,由标准曲xian查出相应de浓度,乘以xi释bei数;亦ke将样品deOD值dai入标准曲xiandeni合方程式,计算出样品浓度,zai乘以xi释bei数,即wei样品de实际浓度。

3. ruo样品OD值高于标准曲xian上限,应适当xi释后重测,计算浓度shi应乘以xi释bei数。 

封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒有效qi稳定性考cha

本试验以封bi蛋白5(CLDN5)wei例

1.        OD值:

正常保cuntiao件下有效qi内he超过有效qi2geyuesuo测OD值bi较

正常有效qi内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2geyue有效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血qing及血浆中加入一定量de封bi蛋白5(CLDN5)标准品,重复测定并计算其品均值,回收率wei测定值与理论值debi率。

        正常保cuntiao件下有效qi内he过有效qi2geyueelisa 试ji盒回收聅hi觳饨醙uo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       xian性:分别于定值血qing及血浆中加入一定量de封bi蛋白5(CLDN5)标准品,并将标本an1:2,1:4,1:8xi释,xian性范围即weixi释后样本中封bi蛋白5(CLDN5)han量de测定值与理论值debi率。

         正常保cuntiao件下有效qi内he过有效qi2geyueelisa 试ji盒回xian性检测结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品测定值de变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次试ji盒dui低值,中值he高值样本进行定量检测,每份样本测定20次,分别计算不同浓度样本de平均值heSD值。

批jian差:选取 3 ge不同批次de试ji盒分别dui低、中、高值定值样本进行定量测定, 每ge样本使用同一试ji盒重复测定 8 次,分别计算不同浓度样本de平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正常保cuntiao件下有效qi内he过有效qi2geyueelisa 试ji盒回精密度检测结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人封bi蛋白5(CLDN5)试ji盒会出xiande问题及jie决办法:

1. 加入反应终zhi液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.yuan因:wei加入酶标记物。

jie决办法:qinganzhao操作步zhou进行。

b.yuan因:试ji盒内容物weinengchong分回。

jie决办法:确定试ji盒内容物回温后zai进行操作。

c.yuan因:室温太低。

jie决办法:ruo室温太低(<19),qing于操作步zhou4,适当yan长温育shijian。

d.yuan因:wei使用试ji盒deqing洗液qing洗。

jie决办法: qing用试ji盒内suoti供deqing洗液qing洗。

e.yuan因:试ji盒已过有效qi限。

jie决办法:qing更换成仍zai有效qi限内de试ji盒。

2. 标准曲xianxian性不佳,或是平行性不hao。

a.yuan因:温育位置避光不hao或受到qiliu干扰。

jie决办法: qing确认温育位置ji不透光ye不透feng(如chou屉内)

b.yuan因:操作shijian拖太久。

jie决办法:qingzai方法熟练后zai进行操作。

c.yuan因:微孔jian相互污染。

jie决办法: 加样品shi,qing小心勿溅出微孔wai,以mian造成其它微孔de污染。

d.yuan因:标准品或酶标记物suo加入de量不一致。

jie决办法:qing使用已校正过de移液枪,并确保其与吸头之jian有高度密合性。

e.yuan因:添加样品或试jide操作方法不正确。

jie决办法:加样品或试jishi,吸头qing勿jiechu微孔。

f.yuan因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后weilike进行下一步zhou)

jie决办法:qing随shi监控洗板机洗板过程,洗完后li即进行下一步zhou。

3. 吸光值均偏高(或xian性不够陡)

a.yuan因:室温太高(>25)

jie决办法: ruo无法jiang低室内温度,qing适当缩duan步zhou4de温育shijian。

b.yuan因:底物溶液受到污染。

jie决办法: ruo发xian底物溶液已呈xian淡蓝色,qing不yaozai使用。

c.yuan因:反应shijian超过太久。

jie决办法:qing控制反应shijian。

d.yuan因ao副昙俏镂廴玖撕心谄渌詊i。

jie决办法:使用过de吸头应li即丢qi,ke避mian试jijian相互污染,凡是试ji(特别是酶标记物与底物溶液)jiechu过de容器应li即qing洗干净。(先以漂白水浸泡,zai以qing水冲洗干净,ke确保无残liu)

4. 阴性标准品de吸光值低于阳性标准品de吸光值。

a.yuan因:微孔中de试jiweinengchong分hun簒iⅫ/span>

jie决办法: 试ji加完后,需轻敲盘四周使其chong分hun合均匀。

b.yuan因:洗板过程发生问题(2-f.)

jie决办法:qingcan考2-f.

c.yuan因:添加样品或酶标记物de量不一致。

jie决办法: qingcan考2-d.

 

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