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人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒

如果您对该荣一登录竫ing巳さ膆ua,ke以
荣一登录名称: 人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒
荣一登录xing号: FBN1
荣一登录展商: ELISA试剂盒
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jian单介绍

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人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒  的详细介绍


人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒

使用说明shu

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒基本原li:

本试剂盒采用双荣一登录紉ing腅LISA法。觤ei谷薋BN1荣一登耲i挥诿竍iao板上,shi验时yang品或biaozhun品中的人FBN1与包被荣一登录结合,youli的成分被洗去。襩ai渭觬u生wu素化的抗人FBN1荣一登录和辣根过氧化wu酶biao记的亲和素。抗人FBN1荣一登录与结簒ian诎蝗僖坏锹忌系娜薋BN1结簒i⑸鷚u素与亲和素特yi性结合er形成**复合wu,youli的成分被洗去。加ruxian色底wu(TMB),TMB在辣根过氧化wu酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成huang色。用酶biao仪在450nm波长处测OD值,人FBN1nongdu与OD450值zhi间呈正bi,tong过绘制biaozhun曲线计算出yang品中人FBN1的nongdu。

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒miao述:

英文名称 Human FBN1 (Fibrillin 1) ELISA Kit
中文名称 人原纤蛋白1(FBN1)酶联**吸附测定试剂盒
货号 X-EL-H2266c 种属 Human/人
guige 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双荣一登录紉ing姆?/span>
检测范围 0.313~20ng/mL 灵敏du 0.188ng/mL

试剂盒组成:

中文名称

英文名称

guige

保cun

  ELISA酶biao板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biaozhun品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biaozhun品&yang品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生wu素化荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素化荣一登录xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRP酶结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(biguang)

酶结合wuxi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩洗di襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(biguang)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fumo

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣一登录说明shu

Product  Description

  1 

 

质检bao告

Certificate of Analysis

  1 

 

特bie说明
*: [96T/48T](打开包装后请ji时检查所有wu品是否齐全完整)
#: 
一周内使用kecun于4℃,需长时间cunfang或多磜en褂胘ian议cun于-20.                                      

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒检测前zhun备工作:

1. 请ti前20分钟从冰xiang中取出试剂簒iao胶鈠hishi温。

2. 将nong缩洗di液用双蒸水xi释(1:25)。wei用完的fang回4℃。从冰xiang中取出的nong缩洗di液ke能有结jing,属于正常现象,ke用40℃水yu微加热使结jing完全溶解后再配制洗di襤ai尤任耫ubu要超过50℃,使用时洗di液ying为shi温)。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

3. biaozhun品10000×gli心1分钟,加rubiaozhun品&yang品xi释液1.0mLzhi冻干biaozhun品謝iao鬵uan盖,静zhi10分钟,上下颠倒shu次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(nongdu为8000pg/mL)。然后根ju需要jinxing倍bixi释(注:bu要直接在反ying孔中jinxing倍bixi释)。jian议配制成以下nongdu:anzhaoxi释方法图例 biaozhun品&yang品xi释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiaozhun品:取0.5mL10ng/mL的上述biaozhun品加ru含有0.5mLbiaozhun品&yang品xi释液的EPguan謝iao煸燃磌e,其yunongdu襩ai薼ei推。 

4. 生wu素化荣一登录工作襤ai簊hi验前计算当次shi验所需用量(以100μL/縵hun疲瑂hi际配制时ying多配制100-200μL。使用前15分钟,以生wu素化荣一登录xi释液xi释nong缩生wu素化荣一登录(1:100)成工作nongdu。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

5. 酶结合wu工作襤ai簊hi验前计算当次shi验所需用量(以100μL/縵hun疲瑂hi际配制时ying多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合wuxi释液xi释nong缩HRP酶结合wu(1:100)成工作nongdu。

礲i帐褂谩Ⅻ/span>

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒biaozhun品xi释方法图例aiㄒ狱/span>500μL/guan为例,也ke根jushi际用量laixi释,如200μL/guan)

            

1. 在各孔中加rubiaozhun品或yang品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加ru100μ生wu素化荣一登录工作襤ai?/span>37℃孵育60分钟

3. 洗di3

4. 加ru100μL酶结合wu工作襤ai?/span> 37℃孵育30分钟

5. 洗di5

6. 加ru90μL底wu溶襤ai?/span> 37℃孵育15分钟zuo右

7. 加ru50μL终止襤ai⒓丛冱/span>450nm波长处测量OD

8. 结果计算

一、操作因素对ELISA结果的ying响ELISA操作步骤复杂,操作bu当将引起较da的误差。以下叙述各个步骤中的ying响因素。

1.加yang

2.温育

3.洗di

4.xian色

5.bi色

二、灰区的设zhitong常qing况下,ELISA定性shi验襶u皔ang衴u焙汀耙跣yu眑aibao告结果,两zhe间有一tiao分界线被称为“yang性判断值”(cut-off valueCO值),这是定性**测定结果bao告的yiju。

三、biao本复查ELISA手工检测过程复杂,ying响因素较多,即使shi内质控在控,也ke能因縵hun洳顈ier造成结果的差yi,因ci加da复查力du是保证结果zhunque性的kekao方法,bi如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的keyi、弱yang性biao本ji少jian模式的检测结果jinxing复查。

四、结果判断和bao告常用下列几謟hi椒ū硎窘峁裹/span>

1.定性测定

2.半定量测定 结果襤ua阋缘蝑u表示。

3.定量测定 即用已知量的biaozhun品作一系列xi释后jinxingELISA测定,绘制biaozhun曲线,结果以优liang量或单位表示。在ELISA定量检测中mei一块反ying板都必xu绘制相ying的biaozhun曲线。

注意shi项:

zi细阅秎iao得鱯hu。

检查试剂盒biao签上的觴ing凇H绻xing冢雡u使用。

an说明shuque定所有试剂齐全(shu量、体积)。

biao本制备要gui范,mei份biao本体积要an2-3个复孔以上的量制备(贮cun),尽量分装做备份。短期内无法shi验zhe,注意低温保cun。

zhun备好所有shi验额外所需wu品,(bi如移液器,试guan,清洗器,酶biao仪)。

an说明shu将所用试剂平衡zhishi温,根ju检测biao本shu量que定所需试剂的量。

检查试剂盒内mei种试剂的贮cuntiao件,保证所有试剂均anzhao试剂盒内说明shu推荐的tiao件cun储。

检查buwen定或zhe变謘hi氖约寥芤hai╞i如沉淀或变色)。觴ing┦约li琤i如biaozhun品xi释液或zhe检测xi释襤ai琸e能在设计时就含有沉淀wu。所有试剂在滴ru酶biao板zhi前,必需充分混匀。er由于沉淀wu的特性,在加ru酶biao板zhi前,必需bu停搅ban。

保证充分的孵育时间和温du。

qiewu使用bu同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

在混合或溶解蛋白溶液时,bi免泡沫产生。

在shi验开始zhi前,癱ai藕胹hi验liu程。

在shi验开始zhi前,清洁工作台。

若有wen题,ying与我gong司或代li商的技术支chi联系

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒结果判断:

1. mei个biaozhun品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设zhi复孔,zeying取其平均值计算。以biaozhun品的nongdu为heng坐biao,OD值为zong坐biao,绘出biaozhun曲线。yike以OD值为heng坐biao,biaozhun品的nongdu为zong坐biao,绘出biaozhun曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件界mian既ke根juyang品OD值,由biaozhun曲线查出相ying的nongdu,乘以xi释倍shu;yike将yang品的OD值代rubiaozhun曲线的拟合方程式,计算出yang品nongdu,再乘以xi释倍shu,即为yang品的shi际nongdu。

3. 若yang品OD值高于biaozhun曲线上限,ying蕇hi眡i释后重测,计算nongdu时ying乘以xi释倍shu。 

原纤蛋白1(FBN1)试剂盒觴ing趙en定性考察

本试验以原纤蛋白1(FBN1)为例

1.        OD值:

正常保cuntiao件下觴ing谀诤统xing冱/span>2个月所测OD值bi较

正常觴ing谀冱/span>OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月觴ing冱/span>OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收lv:分bie于定值血清ji血浆中加ru一定量的原纤蛋白1(FBN1)biaozhun品,重复测定并计算其品均值,回收lv为测定謉i雔ilun值的bilv。

        正常保cuntiao件下觴ing谀诤凸xing冱/span>2个月elisa 试剂盒回收lv检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分bie于定值血清ji血浆中加ru一定量的原纤蛋白1(FBN1)biaozhun品,并将biao本an1:2,1:4,1:8xi释,线性范围即为xi释后yang本中原纤蛋白1(FBN1)含量的测定謉i雔ilun值的bilv。

         正常保cuntiao件下觴ing谀诤凸xing冱/span>2个月elisa 试剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        jing密du:以yang品测定值的变yi系shuCV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批磜en约梁卸缘椭担兄岛透咧祔ang本jinxing定量检测,mei份yang本测定20次,分bie计算bu同nongduyang本的平均值和SD值。

批间差:xuan取 3 个bu同批次的试剂盒分bie对低、中、高值定值yang本jinxing定量测定, mei个yang本使用同一试剂盒重复测定 8 次,分bie计算bu同nongduyang本的平均值ji SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保cuntiao件下觴ing谀诤凸xing冱/span>2个月elisa 试剂盒回jing密du检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒hui出现的wen题ji解决办法:

1. 加ru反ying终止液后,没有吸guang值或吸guang值偏低。

a.原因:wei加ru酶biao记wu。

解决办法:请anzhao操作步骤jinxing。

b.原因:试剂盒内容wuwei能充分回。

解决办法:que定试剂盒内容wu回温后再jinxing操作。

c.原因:shi温太低。

解决办法:若shi温太低(<19),请于操作步骤4,蕇hi毖映の掠奔洹Ⅻ/span>

d.原因:wei使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所ti供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过觴ing谙蕖Ⅻ/span>

解决办法:请更换成仍在觴ing谙弈诘氖约梁小Ⅻ/span>

2. biaozhun曲线线性bu佳,或是平xing性bu好。

a.原因:温育位zhibiguangbu好或受到qiliu干扰。

解决办法: 请que认温育位zhi既bu透guang也bu透风(如抽屉内)

b.原因:操作时间拖太久。

解决办法:请在方法熟练后再jinxing操作。

c.原因:微縵hun湎嗷ノ廴尽Ⅻ/span>

解决办法: 加yang品时,请小心wujian出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:biaozhun品或酶biao记wu所加ru的量bu一致。

解决办法:请使用已xiao正过的移液枪,并que保其与吸头zhi间有高du密合衴uⅫ/span>

e.原因:tian加yang品或试剂的操作方法bu正que。

解决办法:加yang品或试剂时,吸头请wu接触微孔。

f.原因:洗板过程发生wen题(如guanlu堵塞、洗完板后wei立刻jinxing下一步骤)

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即jinxing下一步骤。

3. 吸guang值均偏高(或线性bu够陡)

a.原因:shi温太高(>25)

解决办法: 若无法降低shi内温du,请蕇hi彼醵滩街琰/span>4的温育时间。

b.原因:底wu溶液受到污染。

解决办法: 若发现底wu溶液已呈现淡蓝色,请bu要再使用。

c.原因:反ying时间超过太久。

解决办法:请控制反ying时间。

d.原因:酶biao记wu污染liao盒内其它试剂。

解决办法:使用过的吸头ying立即丢弃,kebi免试糽iang湎嗷ノ廴荆彩鞘约傈/span>(特bie是酶biao记wu与底wu溶液)接触过的容器ying立即清洗干净。(xian以piao白水浸泡,再以清水冲洗干净,keque保无残留)

4. 阴性biaozhun品的吸guang值低于yang性biaozhun品的吸guang值。

a.原因:微孔中的试剂wei能充分混簒iⅫ/span>

解决办法: 试糽iang油旰螅枨崆胮an四周使其充分混合均匀。

b.原因:洗板过程发生wen题(2-f.)

解决办法:请can考2-f.

c.原因:tian加yang品或酶biao记wu的量bu一致。

解决办法: 请can考2-d.

 

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