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ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒

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荣一登录名称: ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒
荣一登录型号: FBN3
荣一登录展商: ELISA试剂盒
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jian单介绍

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ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒  的详蟜u樯埸/font>


ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒

使用shuo明书

ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒基本原li:

本试剂盒采用双荣一登耲ixing腅LISA法。用抗renFBN3荣一登录包被于酶标板上,实yan时样品或标譲i分械膔enFBN3yu包被荣一登录结he,游li的cheng分被xi去。yici加入生物素化祄u箁enFBN3荣一登录和la根过yang化物酶标记的亲和素。抗renFBN3荣一登录yu结he在包被荣一登录上的renFBN3结簒i⑸锼貀u亲和素特异xing结he而形cheng**fuhe物,游li的cheng分被xi去。加入显色底物(TMB),TMB在la根过yang化物酶的cui化下呈现蓝色,加zhong止液后变chenghuang色。用酶标yi在450nm波长chu测ODzhi,renFBN3浓度yuOD450zhi之jian呈正比,通过绘制标zhun曲线ji算出样品中renFBN3的浓度。

ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒描述:

英文名称 Human FBN3 (Fibrillin 3) ELISA Kit
中文名称 ren原蟬huo鞍?(FBN3)酶联**吸fu测ding试剂盒
货号 X-EL-H2268c 种shu Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jian测方法 双荣一登耲ixing姆?/span>
jian测fan围 0.313~20ng/mL 灵敏度 0.188ng/mL

试剂盒组cheng:

中文名称

英文名称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻gan标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标譲i饵/span>&样品xishi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化荣一登录xishi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP胒u醜e物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避guang)

胒u醜e物xishi液

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩xi涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物rong液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(避guang)

反应zhong止液

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣一登录shuo明书

Product  Description

  1 

 

謘hi毂ǜ妩/span>

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuo明
*: [96T/48T](da开包装后请及时jian查所有物品shi否齐全完整)
#: 
一zhou内使用可存于4℃,需长时jian存fang或多ci使用建议存于-20.                                      

ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒jian测qianzhun备gong作:

1. 请提qian20分钟从冰xiang中取出试剂盒,ping衡至室温。

2. 将浓缩xi涤液用双zheng水xishi(1:25)。未用完的fang回4℃。从冰xiang中取出的浓缩xi涤液可能有结晶,shu于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全rong解后zai配制xi涤液(加热温度不要chao过50℃,使用时xi涤液应wei室温)。dang日使用。

3. 标譲i饵/span>10000×gli心1分钟,加入标譲i饵/span>&样品xishi液1.0mL至冻gan标譲i分校齤in管盖,jing置10分钟,上下颠dao数ci,dai其chong分rong解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度wei8000pg/mL)。然后根据需要进xing倍比xishi(zhu:不要直接在反应孔中进xing倍比xishi)。建议配制cheng以下浓度:按zhaoxishi方法图例 标譲i饵/span>&样品xishi液直接作wei空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mL的上述标譲i芳尤牒宵/span>0.5mL标譲i饵/span>&样品xishi液的EP管中,混匀即可,其余浓度yi此类推。 

4. 生物素化荣一登录gong作液:实yanqianji算dangci实yan所需用liang(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。使用qian15分钟,以生物素化荣一登录xishi液xishi浓缩生物素化荣一登录(1:100)chenggong作浓度。dang日使用。

5. 胒u醜e物gong作液:实yanqianji算dangci实yan所需用liang(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。使用qian15分钟,以胒u醜e物xishi液xishi浓缩HRP胒u醜e物(1:100)chenggong作浓度。

dang日使用。

ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒标譲i穢ishi方法图例:(以500μL/管wei例,也可根据实际用lianglaixishi,如200μL/管)

            

1. 在ge孔中加入标譲i坊蜓穏e100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生物素化荣一登录gong作液,37℃孵育60分钟

3. xi涤3ci

4. 加入100μL胒u醜e物gong作液, 37℃孵育30分钟

5. xi涤5ci

6. 加入90μL底物rong液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μLzhong止液,立即在450nm波长chu测liangODzhi

8. 结果ji算

一、操作因素对ELISA结果的影响ELISA操作步骤fu杂,操作不dang将引起絰i蟮奈蟛睢R韵滦鹗鰃e个步骤中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.xi涤

4.显色

5.比色

二、粂i纳柚猛ǔing况下,ELISAdingxing实yan以“阳xing”和“阴xing”lai报告结果,两者jian有一tiao分界线被称wei“阳xingpan断zhi”(cut-off valueCOzhi),这shidingxing**测ding结果报告的yi据。

三、标本fu查ELISA手gongjian测过chengfu杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔jian差异而zaocheng结果的差异,因此加大fu查li度shi保证结果zhun确xing祄u煽糠椒ǎ热缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项mu祄u梢伞⑷跹魓ing标本及少jian模式的jian测结果进xingfu查。

四、结果pan断和报告常用下列ji种方法表示结果:

1.dingxing测ding

2.半dingliang测ding 结果一般以滴度表示。

3.dingliang测ding 即用已知liang的标譲i纷饕幌盗衳ishi后进xingELISA测ding,绘制标zhun曲线,结果以you良liang或单位表示。在ELISAdingliangjian测中每一块反应板du必须绘制xiang应的标zhun曲线。

zhu意事项:

仔xi阅读shuo明书。

jian查试剂盒标签上的觴ing凇H绻鹀hao过觴ing冢胛鹗褂谩Ⅻ/span>

按shuo明书萬anㄋ惺约疗肴ㄊ齦iang、体积)。

标本制备要规fan,每份标本体积要按2-3个fu孔以上的liang制备(zhu存),尽liang分装做备份。短期内无法实yan者,zhu意di温保存。

zhun备好所有实yan额外所需物品,(比如移液器,试管,qingxi器,酶标yi)。

按shuo明书将所用试剂ping衡至室温,根据jian测标本数liang萬anㄋ枋约恋膌iang。

jian查试剂盒内每种试剂的zhu存tiao件,保证所有试剂均按zhao试剂盒内shuo明书推荐的tiao件存chu。

jian查不稳ding或者变质的试剂rong液(比如沉淀或变色)。觴ing┦约li热绫曜ji穢ishi液或者jian测xishi液,可能在设ji时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之qian,必需chong分混匀。而由于沉淀物的特xing,在加入酶标板之qian,必需不停搅拌。

保证chong穤hi姆跤眏ian和温度。

切勿使用不同生chanpi号的试剂取代现有试剂或混he现有试剂。

在混he或rong解蛋白rong液时,避免泡mochan生。

在实yan开shi之qian,安排好实yan流cheng。

在实yan开shi之qian,qing洁gong作台。

ruo有问题,应yu我公司或代li商的jishuzhichi联系

ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒结果pan断:

1. 每个标譲i返命/span>ODzhi减去空白孔的ODzhi后作图,如设置fu孔,ze应取其ping均zhiji算。以标譲i返呐ǘ葁ei横坐标,ODzhiwei纵坐标,绘出标zhun曲线。yi可以ODzhiwei横坐标,标譲i返呐ǘ葁ei纵坐标,绘出标zhun曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件界面既可根据样品ODzhi,由标zhun曲线查出xiang应的浓度,cheng以xishi倍数;yi可将样品的ODzhi代入标zhun曲线的拟he方cheng式,ji算出样苀angǘ龋瑉aicheng以xishi倍数,即wei样品的实际浓度。

3. ruo样品ODzhi高于标zhun曲线上限,应适dangxishi后重测,ji算浓度时应cheng以xishi倍数。 

ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒觴ing谖萪ingxing考察

本试yan以原蟬huo鞍?(FBN3)wei例

1.        ODzhi:

正常保存tiao件下觴ing谀诤蚦hao过觴ing冱/span>2个月所测OD謉ang冉吸/span>

正常觴ing谀冱/span>ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chao过2个月觴ing冱/span>ODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于dingzhixueqing及xue浆中加入一dingliang的原蟬huo鞍?(FBN3)标譲i罚豧u测ding并ji算其品均zhi,回收率wei测dingzhiyulilunzhi的比率。

        正常保存tiao件下觴ing谀诤凸xing冱/span>2个月elisa 试剂盒回收聅hi觳饨峁?/span>

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线xing:分别于dingzhixueqing及xue浆中加入一dingliang的原蟬huo鞍?(FBN3)标譲i罚⒔瓯景滁/span>1:2,1:4,1:8xishi,线xingfan围即weixishi后样本謝ingshuo鞍?(FBN3)含liang的测dingzhiyulilunzhi的比率。

         正常保存tiao件下觴ing谀诤凸xing冱/span>2个月elisa 试剂盒回线xingjian测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品测dingzhi的变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

pi内差:取同一pici试剂簒ie詃izhi,中zhi和高zhi样本进衳ie╨iangjian测,每份样眏ing鈊ing20ci,分别ji算不同浓度样本的ping均zhi和SDzhi。

pijian差:选取 3 个不同pici的试剂盒分别对di、謝iao⒏遺hidingzhi样本进衳ie╨iang测ding, 每个样本使用同一试剂盒重fu测ding 8 ci,分别ji算不同浓度样本的ping均zhi及 SD zhi。(pi内差: CV<10%;pijian差: CV<11%)

       正常保存tiao件下觴ing谀诤凸xing冱/span>2个月elisa 试剂盒回精密度jian测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

ren原蟬huo鞍?(FBN3)试剂盒会出蟴hi奈侍饧敖饩霭旆ǎ裹/span>

1. 加入反应zhong止液后,没有吸guangzhi或吸guangzhi偏di。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请按zhao操作步骤进衳iaoⅫ/span>

b.原因:试剂盒内rong物未能chong分回。

解决办法:萬anㄊ约梁心趓ong物回温后zai进xing操作。

c.原因:室温taidi。

解决办法:ruo室温taidi(<19),请于操作步骤4,适dang延长温育时jian。

d.原因:未使用试剂盒的qingxi液qingxi。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的qingxi液qingxi。

e.原因:试剂盒已过觴ing谙蕖Ⅻ/span>

解决办法:请geng换chengreng在觴ing谙弈诘氖约梁xiaoⅫ/span>

2. 标zhun曲线线xing不佳,或shipingxingxing不好。

a.原因:温育位置避guang不好或受到qi流gan扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透guang也不透风(如抽屉内)

b.原因:操作时jiantuotai久。

解决办法:请在方法熟练后zai进xing操作。

c.原因:微孔jianxianghu污染。

解决办法: 加样品时,请xiao心勿溅出微孔外,以免zaocheng其它微孔的污染。

d.原因:标譲i坊蛎副昙俏锼尤氲膌iang不一致。

解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其yu吸头之jian有高度密hexing。

e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,吸头请勿接chu微孔。

f.原因:xi板过cheng发生问题(如管耭an氯i完板后未立刻进xing下一步骤)

解决办法:请随时监控xi板机xi板过cheng,xi完后立即进xing下一步骤。

3. 吸guangzhi均偏高(或线xing不gou陡)

a.原因:室温tai高(>25)

解决办法: ruo无法降di室内温度,请适dang缩短步骤4的温育时jian。

b.原因:底物rong液受到污染。

解决办法: ruo发蟴hi孜飏ong液已呈蟴hi渡氩灰獄ai使用。

c.原因:反应时jianchao过tai久。

解决办法:请控制反应时jian。

d.原因:酶标记物污染了盒内其它试剂。

解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试剂jianxianghu污染,凡shi试剂(特别shi酶标记物yu底物rong液)接chu过的rong器应立即qingxigan净。(先以漂白水浸泡,zai以qing水冲xigan净,可确保无残留)

4. 阴xing标譲i返奈黦uangzhidi于阳xing标譲i返奈黦uangzhi。

a.原因:微孔中的试剂未能chong分混簒iⅫ/span>

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四zhou使其chong分混he均匀。

b.原因:xi板过cheng发生问题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的liang不一致。

解决办法: 请参考2-d.

 

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