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人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒

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荣一denglu名称: 人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒
荣一denglu型号: mxd1
荣一denglu展商: ELISAshi剂盒
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简dan介绍

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人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒  的详xi介绍


人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒

使用shuoming书

人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒基ben原理:

benshi剂盒cai用双荣一denglu紉ing腅LISA法。用抗人mxd1荣一deng耲i挥诿副阞an上,实验时样品或标准品中的人mxd1与包被荣一denglu结he,游离的成分被洗去。依ci加入shengwu素化的抗人mxd1荣一denglu和辣根过氧化wu酶标记的亲和素。抗人mxd1荣一denglu与结he在包被荣一denglu上的人mxd1结he、shengwu素与亲和素特异性结he而形成**复hewu,游离的成分被洗去。加入显色diwu(TMB),TMB在辣根过氧化wu酶的催化下呈现蓝色,加zhong止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长chuceOD值,人mxd1浓度与OD450值之间硈hou龋ü嬷票曜记呒扑愠鲅分腥薽xd1的浓度。

人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒描述:

英文名称 Human MXD1 (MAX Dimerization Protein 1) ELISA Kit
中文名称 人MAX二ju化蛋白1(mxd1)酶联**吸附ce定shi剂盒
货号 X-EL-H0896c zhongshu Human/人
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检cefang法 双荣一denglu紉ing姆?/span>
检cefanwei 0~ 灵敏度 0

shi剂盒组成:

中文名称

英文名称

gui格

baocun

  ELISA酶标ban(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩shengwu素化荣一denglu

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

shengwu素化荣一denglu稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结hewu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结hewu稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

diwurong液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应zhong止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封banfu膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣一denglushuoming书

Product  Description

  1 fen

 

謘hi靊ao告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别shuoming
*: [96T/48T](打开包zhuang后请ji时检cha所有wu品shi否qiquan完整)
#: 
一周na使用可cun于4℃,需长时间cun放或多磜en褂媒ㄒ閏un于-20.                                      

人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒检ce前准备gong作:

1. 请ti前20穤hong哟颖鵻iang中取出shi剂盒,ping衡至shi温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰xiang中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,shu于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完quanrong解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应weishi温)。当日使用。

3. 标准品10000×g离心1穤hong樱尤氡曜计饵/span>&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,xuan紧管gai,静置10穤hong樱舷碌叩故齝i,待其充分rong解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度wei8000pg/mL)。然后根据需要进xing倍比稀释(注:不要直jie在反应孔中进xing倍比稀释)。建议配制成以下浓度:an照稀释fang法图例 标准品&样品稀释液直jie作wei空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入han有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。 

4. shengwu素化荣一denglugong作液:实验前计算当磜en笛樗栌昧浚ㄒ狱/span>100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15穤hong樱詓hengwu素化荣一denglu稀释襤e∈团ㄋ鮯hengwu素化荣一denglu(1:100)成gong作浓度。当日使用。

5. 酶结hewugong作液:实验前计算当磜en笛樗栌昧浚ㄒ狱/span>100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15穤hong樱悦附醜ewu稀释襤e∈团ㄋ酎/span>HRP酶结hewu(1:100)成gong作浓度。

当日使用。

人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒标准品稀释fang法图例:(以500μL/管wei例,也可根据实际用量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90穤hong尹/span>

2. 加入100μshengwu素化荣一denglugong作液,37℃孵育60穤hong尹/span>

3. 洗涤3ci

4. 加入100μL酶结hewugong作液, 37℃孵育30穤hong尹/span>

5. 洗涤5ci

6. 加入90μLdiwurong液, 37℃孵育15穤hong幼笥腰/span>

7. 加入50μLzhong止液,立即在450nm波长chuce量OD

8. 结guo计算

一、cao作因素对ELISA结guo的影响ELISAcao作步zhou复杂,cao作瞙uai苯珁in起较da的误cha。以下叙述各个步zhou中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰区的设置通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来bao告结guo,两者间有一tiao分界线被称wei“阳性pan断值ao?/span>cut-off valueCO值),这shi定性**ce定结guobao告的依据。

三、标ben复chaELISA手gong检ce过程复杂,影响因素较多,即使shina质控在控,也可能因孔间cha异而造成结guo的cha异,因此加da复chali度shibao证结guo准确性的可靠fang法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、弱阳衴uan阞enjishaojian模式的检ce结guo进xing复cha。

四、结guopan断和bao告常用下列几zhongfang法表shi结guo:

1.定性ce定

2.半定量ce定 结guo一般以di度表shi。

3.定量ce定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进xingELISAce定,绘制标准曲线,结guo以优liang量或dan位表shi。在ELISA定量检ce中每一kuai反应ban都必须绘制相应的标准曲线。

注意事项:

仔xi阅读shuoming书。

检chashi剂盒标qian上的觴ing凇H鏶uo超过觴ing冢胛鹗褂谩Ⅻ/span>

anshuoming书萬anㄋ衧hi剂qiquan(数量、ti积)。

标ben制备要guifan,每fen标benti积要an2-3个复孔以上的量制备(贮cun),尽量穤hong白霰竑en。短期na无法实验者,注意低温baocun。

准备好所有实验e外所需wu品,(比如移液器,shi管,清洗器,酶标仪)。

anshuoming书将所用shi剂ping衡至shi温,根据检ce标ben数量萬anㄋ鑣hi剂的量。

检chashi剂盒na每zhongshi剂的贮cuntiao件,bao证所有shi剂均an照shi剂盒nashuoming书推jian的tiao件cun储。

检cha不稳定或者变质的shi剂rong液(比如chen淀或变色)。觴ing﹕hi剂,比如标准品稀释液或者检ce稀释液,可能在设计蔮en蚳an有chen淀wu。所有shi剂在di入酶标ban之前,必需充分混匀。而由于chen淀wu的特性,在加入酶标ban之前,必需不停搅拌。

bao证充分的孵育时间和温度。

切勿使用不同shengchan批号的shi剂取代蟴hong衧hi剂或混he蟴hong衧hi剂。

在混he或rong解蛋白rong液蔮ao苊馀菽璫hansheng。

在实验开shi之前,an排好实验流程。

在实验开shi之前,清洁gong作台。

若有wen题,应与我公司或代理商的技术支持联系

人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒结guopan断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置复孔,ze应取其ping均值计算。襶uan曜计返呐ǘ葁ei横坐标,OD謉i獄ong坐标,绘出标准曲线。亦可以OD謉i嶙辏曜计返呐ǘ葁eizong坐标,绘出标准曲线。

2. 推jian使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标准曲线cha出相应的浓度,cheng以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟hefang程式,计算出样品浓度,再cheng以稀释倍数,糲i返氖导逝ǘ取Ⅻ/span>

3. 若样品OD值gao于标准曲线上限,应适当稀释后重ce,计算浓度时应cheng以稀释倍数。 

MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒觴ing谖榷ㄐ钥疾朦/span>

benshi验以MAX二ju化蛋白1(mxd1)wei例

1.        OD值:

正常baocuntiao件下觴ing趎a和超过觴ing冱/span>2个月所ceOD值比较

正常觴ing趎aOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月觴ing冱/span>OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:分别于定值血清ji血浆中加入襤uan康腗AX二ju化蛋白1(mxd1)标准品,重复ce定bing计算其品均值,回shou率weice定值与理论值的比率。

        正常baocuntiao件下觴ing趎a和过觴ing冱/span>2个月elisa shi剂盒回shou聅hi靋e结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分别于定值血清ji血浆中加入襤uan康腗AX二ju化蛋白1(mxd1)标准品,bing将标benan1:2,1:4,1:8稀释,线性fanwei糲i∈秃笱鵥en中MAX二ju化蛋白1(mxd1)han量的ce定值与理论值的比率。

         正常baocuntiao件下觴ing趎a和过觴ing冱/span>2个月elisa shi剂盒回线性检ce结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品ce定值的变异系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批nacha:取同一批cishi剂盒对低值,中值和gao值样ben进xing定量检ce,每fen样bence定20ci,分别计算不同浓度样ben的ping均值和SD值。

批间cha:选取 3 个不同批ci的shi剂盒分别对低、中、gao值定值样ben进xing定量ce定, 每个样ben使用同一shi剂盒重复ce定 8 ci,分别计算不同浓度样ben的ping均值ji SD 值。(批nacha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       正常baocuntiao件下觴ing趎a和过觴ing冱/span>2个月elisa shi剂盒回精密度检ce结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人MAX二ju化蛋白1(mxd1)shi剂盒会出现的wen题ji解决办法:

1. 加入反应zhong止液后,mei有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记wu。

解决办法:请an照cao作步zhou进xing。

b.原因:shi剂盒narongwu未能充分回。

解决办法:萬an╯hi剂盒narongwu回温后再进xingcao作。

c.原因:shi温太低。

解决办法:若shi温太低(<19),请于cao作步zhou4,适当延长温育时间。

d.原因:未使用shi剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用shi剂盒na所ti供的清洗液清洗。

e.原因:shi剂盒已过觴ing谙蕖Ⅻ/span>

解决办法:请geng换成仍在觴ing谙辬a的shi剂盒。

2. 标准曲线线性不jia,或shipingxing性不好。

a.原因:温育位置避光不簃ei蚴艿狡鞲扇拧Ⅻ/span>

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉na)

b.原因:cao作时间拖太久。

解决办法:请在fang法熟lian后再进xingcao作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样品蔮ao胄⌒奈鸾Τ鑫⒖淄猓悦庠斐善渌⒖椎奈廴尽Ⅻ/span>

d.原因:标准品或酶标记wu所加入的量不一zhi。

解决办法:请使用已校正过的移液枪,bing确bao其与吸头之间有gao度密he性。

e.原因:添加样品或shi剂的cao作fang法不正确。

解决办法:加样品或shi剂蔮ao非胛餵iechu微孔。

f.原因e碽an过程发shengwen题(如管耭an氯⑾赐阞an后未立刻进xing下一步zhou)

解决办法:请随时监控洗ban机洗ban过程,洗完后立即进xing下一步zhou。

3. 吸光值均偏gao(或线性不筯uan伏/span>)

a.原因:shi温太gao(>25)

解决办法: 若无法降低shina温度,请适当缩短步zhou4的温育时间。

b.原因:diwurong液受到污染。

解决办法: 若发现diwurong液已呈现dan蓝色,请不要再使用。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办法:请控制反应时间。

d.原因:酶标记wu污染了盒na其它shi剂。

解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免shi糽iang湎嗷ノ廴荆瞫hishi剂(特别shi酶标记wu与diwurong液)jiechu过的rong器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确bao无残留)

4. 阴衴uan曜计返奈庵档陀谘粜yuan曜计返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原因:微孔中的shi剂未能充分混he。

解决办法: shi糽iang油旰螅枨崆门趟闹苁蛊涑浞只靐e均匀。

b.原因e碽an过程发shengwen题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记wu的量不一zhi。

解决办法: 请参考2-d.

 

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