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人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒

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简dan介绍

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人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒  的xiang细介绍


人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒

使yong说明书

人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒基本原li:

本试ji盒caiyong双荣襤uai锹技xing腅LISA法。yongkang人ACE荣襤uai锹糱ao被yu酶标板上,实验时样品huo标准苀en械娜薃CE与bao被荣襤uai锹冀岷希瑈ou离的成fen被洗qu。依次加入生wu素hua的kang人ACE荣襤uai锹己屠备鮤uawu酶标记的亲和素。kang人ACE荣襤uai锹加虢岷显赽ao被荣襤uai锹忌xi娜薃CE结合、生wu素与亲和素特yi性结合而形成**复合wu,you离的成fen被洗qu。加入显色底wu(TMB),TMB在辣根过氧huawu酶的催hua下呈xian蓝色,加终止液后变成huang色。yong酶标仪在450nm波长chuceOD值,人ACE浓度与OD450值之间呈正比,tong过绘zhi标准曲线计算chu样苀en腥薃CE的浓秖uⅫ/span>

人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒描述:

英文名称 Human ACE (Angiotensin I Converting Enzyme) ELISA Kit
中文名称 人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)酶lian**吸附ce定试ji盒
货hao X-EL-H0002c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双荣襤uai锹技xing姆?/span>
检ce范wei 0.781~50ng/mL 灵敏度 0.469ng/mL

试ji盒组成:

中文名称

英文名称

规格

bao存

  ELISA酶标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生wu素hua荣襤uai锹稽/span>

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素hua荣襤uai锹枷∈鸵裹/span>

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合wu稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗di液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣襤uai锹妓得魇椟/span>

Product  Description

  1 fen

 

謘hi毂ǜ妩/span>

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别说明
*: [96T/48T](打开baozhuang后请及时检cha所youwu品是fu齐全wan整)
#: 
一周na使yong可存yu4℃,需长时间存放huo多次使yong建议存yu-20.                                      

人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒检ceqian准备工作:

1. 请提qian20fenzhong从冰箱中quchu试ji簒iao胶庵潦襴en。

2. 将浓缩洗di液yong双zheng水稀释(1:25)。未yongwan的放回4℃。从冰箱中quchu的浓缩洗di液可能you结晶,属yu正changxian象,可yong40℃水浴wei加热使结晶wan全溶解后再配zhi洗di液(加热wen度不要超过50℃,使yong时洗di液应为室wen)。dang日使yong。

3. 标准品yu10000×g离心1fenzhong,加入标准品&样品稀释液1.0mL至dong干标准苀enxiao齤in管盖,静置10fenzhong,上下颠倒数次,待qi充fen溶解后,yong移液器将qi轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进xing倍眗en∈停ㄗⅲ翰灰苯釉诜从字薪鴛ing倍眗en∈停=ㄒ榕鋤hi成以下浓度:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空bai孔0ng/mL。如配zhi5ng/mL标准品:qu0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含you0.5mL标准品&样品稀释液的EP管謝iao煸燃纯桑琿i余浓度依磗i嗤啤Ⅻ/span> 

4. 生wu素hua荣襤uai锹脊ぷ饕海菏笛閝ian计算dang次实验所需yong量(以100μL/孔计),实际配zhi时应多配zhi100-200μL。使yongqian15fenzhong,以生wu素hua荣襤uai锹枷∈鸵合∈团ㄋ跎鷚u素hua荣襤uai锹稽/span>(1:100)成工作浓秖uang日使yong。

5. 酶结合wu工作液:实验qian计算dang次实验所需yong量(以100μL/孔计),实际配zhi时应多配zhi100-200μL。使yongqian15fenzhong,以酶结合wu稀释液稀释浓缩HRP酶结合wu(1:100)成工作浓秖uⅫ/span>

dang日使yong。

人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据实际yong量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准品huo样品各100μL 37℃孵育90fenzhong

2. 加入100μ生wu素hua荣襤uai锹脊ぷ饕海?/span>37℃孵育60fenzhong

3. 洗di3

4. 加入100μL酶结合wu工作液, 37℃孵育30fenzhong

5. 洗di5

6. 加入90μL底wu溶液, 37℃孵育15fenzhong左右

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长chuce量OD

8. 结果计算

一、cao作yin素对ELISA结果的影响ELISAcao作buzhou复杂,cao作瞙uai苯鸾洗蟮奈骳ha。以下叙述各个buzhou中的影响yin素。

1.加样

2.wen育

3.洗di

4.显色

5.比色

er、灰区的设置tongchangqing况下,ELISA定性实验以“阳性”和“yin性”来报告结果,两者间you一条fen界线被称为“阳性舩iexian怠bao?/span>cut-off valueCO值),这是定性**ce定结果报告的依据。

三、标本复chaELISA手工检ce过程复杂,影响yin素较多,即使室na质控在控,也可能yin孔间chayi而造成结果的chayi,yin此加大复chali度是baozheng结果譲i沸缘目煽糠椒ǎ热缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康目梢伞⑷跹粜员瓯炯吧偌hi的检ce结果进xing复cha。

四、结果舩ie虾捅ǜ鎐hangyong下lie几种方法表示结果:

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果一般以滴度表蔶inⅫ/span>

3.定量ce定 即yong已知量的标准品作一xilie稀释后进xingELISAce定,绘zhi标准曲线,结果以优羓i縣uodan位表蔶inT冱/span>ELISA定量检ce中每一块反应板都必须绘zhixiang应的标准曲线。

注意shi项:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检cha试ji盒标签蓌i挠xingi。如果超过觴ingi,请勿使yong。

按说明书确定所you试ji齐全(数量、体ji)。

标本zhi备要规范,每fen标本体ji要按2-3个复孔以蓌i牧縵hi备(贮存),jin量fenzhuang做备fen。短qina无法实验者,注意低wenbao存。

准备好所you实验额外所需wu品,(比如移液器,试管,清洗器,酶标仪)。

按说明书将所yong试ji平衡至室wen,根据检ce标本数量确定所需试ji的量。

检cha试ji盒na每种试ji的贮存条jian,baozheng所you试ji均按照试ji盒na说明书推荐的条jian存储。

检cha不稳定huo者变质的试ji溶液(比如chen淀huo变色)。觴ing┦詊i,比如标准品稀释液huo者检ce稀释液,可能在设计时就含youchen淀wu。所you试ji在滴入酶标板之qian,必需充fen混詑u6蓎uchen淀wu的特性,在加入酶标板之qian,必需不停搅ban。

baozheng充fen的孵育时间和wen秖uⅫ/span>

qie勿使yong不同生chan批hao的试jiqu代xianyou试jihuo混合xianyou试ji。

在混合huo溶解蛋bai溶液蔮ao苊馀輒ochan生。

在实验开shi之qian,安pai好实验liu程。

在实验开shi之qian,清洁工作台。

ruoyou问ti,应与我公司huo代li商的技术支chilianxi

人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒结果舩ie吸/span>:

1. 每个标准品的OD值jianqu空bai孔的OD值后作图,如设置复孔,则应quqi平均值计算。以标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘chu标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘chu标准曲线。

2. 推荐使yongzhuan业的曲线zhi作软jian,如curve expert 1.3huo1.4,在软jian界面ji可根据样品OD值,由标准曲线chachuxiang应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的ni合方程shi,计算chu样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓秖uⅫ/span>

3. ruo样品OD值高yu标准曲线上限,应适dang稀释后重ce,计算浓度时应乘以稀释倍数。 

血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒觴ingi稳定性考察

本试验以血管jinzhang素转hua酶 (ACE)为例

1.        OD值:

正changbao存条jian下觴ingina和超过觴ingi2个月所ceOD謉ang冉吸/span>

正chang觴inginaOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月觴ingiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:fen别yu定值血清及血浆中加入一定量的血管jinzhang素转hua酶 (ACE)标准品,重复ce定并计算qi品均值,回收率为ce定謉i雔i论值的比率。

        正changbao存条jian下觴ingina和过觴ingi2个月elisa 试ji盒回收聅hi靋e结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:fen别yu定值血清及血浆中加入一定量的血管jinzhang素转hua酶 (ACE)标准品,并将标本按1:2,1:4,1:8稀释,线性范wei即为稀释后样本中血管jinzhang素转hua酶 (ACE)含量的ce定謉i雔i论值的比率。

         正changbao存条jian下觴ingina和过觴ingi2个月elisa 试ji盒回线性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品ce定值的变yixi数CV表蔶inⅫ/span>CV%=SD/meanx100

批nacha:qu同一批次试ji簒ie缘椭担兄岛透咧笛窘鴛ing定量检ce,每fen样本ce定20次,fen别计算不同浓度样本的平均值和SD值。

批间cha:选qu 3 个不同批次的试ji盒fen别对低、謝iao⒏咧刀ㄖ笛窘鴛ing定量ce定, 每个样本使yong同一试ji盒重复ce定 8 次,fen别计算不同浓度样本的平均值及 SD 值。(批nacha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       正changbao存条jian下觴ingina和过觴ingi2个月elisa 试ji盒回精密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人血管jinzhang素转hua酶 (ACE)试ji盒会chuxian的问ti及解决办法:

1. 加入反应终止液后,没you吸光值huo吸光值pian低。

a.原yin:未加入酶标记wu。

解决办法:请按照cao作buzhou进衳iaoⅫ/span>

b.原yin:试ji盒narongwu未能充fen回。

解决办法:确定试ji盒narongwu回wen后再进xingcao作。

c.原yin:室wen太低。

解决办法:ruo室wen太低(<19),请yucao作buzhou4,适dang延长wen育时间。

d.原yin:未使yong试ji盒的清洗液清洗。

解决办法: 请yong试ji盒na所提供的清洗液清洗。

e.原yin:试ji盒已过觴ingi限。

解决办法:请更huan成仍在觴ingi限na的试ji簒iaoⅫ/span>

2. 标准曲线线性不佳,huo是平xing性不好。

a.原yin:wen育位置避光不好huo受到气liu干扰。

解决办法: 请确renwen育位置ji不透光也不透风(如抽屉na)

b.原yin:cao作时间拖太jiu。

解决办法:请在方法熟练后再进xingcao作。

c.原yin:wei孔间xianghu污萰inⅫ/span>

解决办法: 加样品蔮ao離iao心勿溅chuwei孔外,以免造成qi它wei孔的污萰inⅫ/span>

d.原yin:标准品huo酶标记wu所加入的量不一致。

解决办法:请使yong已xiao正过的移液枪,并确baoqi与吸蚮en鋣ou高度密合性。

e.原yin:tian加样品huo试ji的cao作方法不正确。

解决办法:加样品huo试ji蔮ao非胛鸾哟ei孔。

f.原yin:洗板过程发生问ti(如管路堵塞、洗wan板后未立刻进xing下一buzhou)

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗wan后立即进xing下一buzhou。

3. 吸光值均pian高(huo线性不gou陡)

a.原yin:室wen太高(>25)

解决办法: ruo无法降低室nawen度,请适dang缩短buzhou4的wen育时间。

b.原yin:底wu溶液受到污萰inⅫ/span>

解决办法: ruo发xian底wu溶液已呈xian淡蓝色,请不要再使yong。

c.原yin:反应时间超过太jiu。

解决办法:请控zhi反应时间。

d.原yin:酶标记wu污染liao盒naqi它试ji。

解决办法:使yong过的吸头应立即丢弃,可避免试ji间xianghu污染,凡是试ji(特别蕅iao副昙莣u与底wu溶液)接触过的rong器应立即清洗干净。(先以漂bai水浸泡,再以清水冲洗干净,可确bao无残留)

4. yin性标准品的吸光值低yu阳性标准品的吸光值。

a.原yin:wei孔中的试ji未能充fen混合。

解决办法: 试ji加wan后,需轻qiao盘四周使qi充fen混合均詑uⅫ/span>

b.原yin:洗板过程发生问ti(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原yin:tian加样品huo酶标记wu的量不一致。

解决办法: 请参考2-d.

 

荣襤uai锹ji粞狱/b>
标ti
lianxi人
lianxidian话
narong
验zheng码
点击huan一zhang
注:1.可以使yong快捷键Alt+ShuoCtrl+Enter发送信息!
2.如you必要,请您留下您的xiang细lianxi方shi!