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人降钙素(CT)试剂盒

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荣一登录名chen: 人降钙素(CT)试剂盒
荣一登录型号: CT
荣一登录展商: ELISA试剂盒
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简单介绍

万人牛牛


人降钙素(CT)试剂盒  的xiang细介绍


人降钙素(CT)试剂盒

使用说ming书

人降钙素(CT)试剂盒基本原理:

本试剂盒采用双荣一登耲i行腅LISA法。用抗人CT荣一登录包被于酶biao板上,shi验时样品huobiao准品zhong的人CT与包被荣一登录结合,youli的成分被洗qu。依次jia入生物素hua的抗人CT荣一登录和辣根过氧hua物酶biaoji的亲和素。抗人CT荣一登耲ia虢岷xian诎蝗僖坏锹忌系娜薈T结合、生物素与亲和素特异xing结合而xing成**复合物,youli的成分被洗qu。jia入xian色底物(TMB),TMBzai辣根过氧hua物酶的催hua下呈现蓝色,jia终止液后变成huang色。用酶biao仪zai450nm波长chuceOD值,人CT浓度与OD450值之间呈正比,tong过hui制biao譲i呒扑愠鲅穤hong人CT的浓度

人降钙素(CT)试剂盒miaoshu:

英文名chen Human CT (Calcitonin) ELISA Kit
zhong文名chen 人降钙素(CT)酶联**xi附ce定试剂盒
货号 X-EL-H0136c 謟hi簏/span> Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双荣一登耲i行姆?/span>
检ce范围 15.625~1000pg/mL 灵敏度 9.375pg/mL

试剂盒组成:

zhong文名chen

英文名chen

规ge

bao存

  ELISA酶biao板(可chaixie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素hua荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素hua荣一登录稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣一登录说ming书

Product  Description

  1 

 

zhi检报gao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说ming
*: [96T/48T](打开包装后qing及时检查所you物品shifu齐全完整)
#: 
一周内使用可存于4℃,需长时间存放huoduo磜en褂媒ㄒ榇嬗冱/span>-20.                                      

人降钙素(CT)试剂盒检ce前准备gongzuo:

1. qing提前20分钟从bing箱zhongqu出试剂盒,平衡zhi室温。

2. 将浓缩洗祔ou河盟珃heng水稀释(1:25)。wei用完的放回4℃。从bing箱zhongqu出的浓缩洗祔ou嚎赡躽ou结晶,属于正常现象,可用40℃水浴weijia热使结晶完全溶解后再配制洗祔ou海╦ia热温度瞙ui?/span>50℃,使用时洗祔ou簓ing为室温)。当日使用。

3. biao准品10000×gli心1分钟,jia入biao准品&样品稀释液1.0mLzhi冻干biao准品zhong,旋紧管盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用yi液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:瞙ui眏iezai反ying孔zhong进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:按照稀释方法tu例 biao准品&样品稀释液直jiezuo为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao准品:qu0.5mL10ng/mL的上shubiao准品jia入hanyou0.5mLbiao准品&样品稀释液的EP管zhong,混匀ji可,其余浓度依此类tui。 

4. 生物素hua荣一登录gongzuo液:shi验前计算当次shi验所需用liang(以100μL/孔计),shi际配制时yingduo配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素hua荣一登录稀释液稀释浓缩生物素hua荣一登录(1:100)成gongzuo浓秖u5比帐褂谩Ⅻ/span>

5. 酶结合物gongzuo液:shi验前计算当次shi验所需用liang(以100μL/孔计),shi际配制时yingduo配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成gongzuo浓秖uⅫ/span>

当日使用。

人降钙素(CT)试剂盒biao准品稀释方法tu例:(以500μL/管为例,也可根据shi际用liang来稀释,如200μL/管)

            

1. zaige孔zhongjia入biao准品huo样品ge100μL 37℃孵育90分钟

2. jia入100μ生物素hua荣一登录gongzuo液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. jia入100μL酶结合物gongzuo液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. jia入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左you

7. jia入50μL终止液,立jizai450nm波长chuceliangOD

8. 结果计算

一、caozuo因素duiELISA结果的ying响ELISAcaozuo步骤复杂,caozuo不当将引起较da的误差。以下叙shuge个步骤zhong的ying响因素。

1.jia样

2.温育

3.洗涤

4.xian色

5.比色

er、hui区的设置tong常qing况下,ELISA定xingshi验以“yangxing”和“yinxing”来报gao结果,两者间you一tiao分jie线被chen为“yangxing舩ie现怠bao?/span>cut-off valueCO值),这shi定xing**ce定结果报gao的依据。

三、biao本复查ELISA手gong检ce过程复杂,ying响因素较duo,ji使室内zhi控zai控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此jiada复查li度shibao证结果准确xing的可靠方法,比如duiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等xiang目的可疑、弱yang衴uan瓯炯吧偌鹠o式的检ce结果进行复查。

四、结果舩ie虾捅╣ao常用下lie几种方法表shi结果:

1.定xingce定

2.半定liangce定 结果一般以滴度表shi。

3.定liangce定 ji用yizhiliang的biao准品zuo一系lie稀释后进行ELISAce定,hui制biao譲i撸峁杂帕糽ianghuo单位表shi。zaiELISA定liang检cezhong每一块反ying板du必须hui制相ying的biao譲i摺Ⅻ/span>

注意事xiang:

仔细阅读说ming书。

检查试剂盒biao签上的you效期。如果超过you效期,qing勿使用。

按说ming书确定所you试剂齐全(数liang、体积)。

biao本制备要规范,每份biao本体积要按2-3个复孔以上的liang制备(贮存),尽liang分装zuo备份。短期内无法shi验者,注意低温bao存。

准备好所youshi验额wai所需物品,(比如yi液器,试管,清洗器,酶biao仪)。

按说ming书将所用试剂平衡zhi室温,根据检cebiao本数liang确定所需试剂的liang。

检查试剂盒内每謟hi约恋闹鎡iao件,bao证所you试剂jun按照试剂盒内说ming书tui荐的tiao件存储。

检查不wen定huo者变zhi的试剂溶液(比如沉淀huo变色)。youxie试剂,比如biao准品稀释液huo者检ce稀释液,可能zai设计时就hanyou沉淀物。所you试剂zai祑en朊竍iao板之前,必需充分混詑u6捎诔恋砦锏奶豿ing,zaijia入酶biao板之前,必需不停搅拌。

bao证充分的孵育时间和温秖uⅫ/span>

莤ing鹗褂貌籺ong生产批号的试剂qu代现you试剂huo混合现you试剂。

zai混合huo溶解蛋白溶液蔮ao苊馀菽Ⅻ/span>

zaishi验开始之前,安排好shi验流程。

zaishi验开始之前,清洁gongzuotai。

ruoyouwen题,ying与我公司huo代理商的ji术支硓hi袋/span>

人降钙素(CT)试剂盒结果舩ie吸/span>:

1. 每个biao准品的OD值减qu空白孔的OD值后zuotu,如设置复孔,则yingqu其平jun值计算。襶uan曜计返呐ǘ任醶uobiao,OD值为纵zuobiao,hui出biao譲i摺R嗫梢狱/span>OD值为横zuobiao,biao准品的浓度为纵zuobiao,hui出biao譲i摺Ⅻ/span>

2. tui荐使用专业的曲线制zuo软件,如curve expert 1.3huo1.4,zai软件jie面既可根据样品OD值,由biao譲i卟槌鱿鄖ing的浓度,乘以稀释倍数ui嗫山返命/span>OD值代入biao譲i叩哪夂戏匠淌剑扑愠鲅放ǘ龋俪艘韵∈捅妒琷i为样品的shi际浓秖uⅫ/span>

3. ruo样品OD值高于biao譲i呱舷蓿瑈ing蕇hi毕∈秃髗hongce,计算浓度时ying乘以稀释倍数。 

降钙素(CT)试剂盒you效期wen定xing考察

本试验以降钙素(CT)为例

1.        OD值:

正常bao存tiao件下you效期内和超过you效期2个月所ceOD值比较

正常you效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月you效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血清及血浆zhongjia入襤uan╨iang的降钙素(CT)biao准品,zhong复ce定并计算其品jun值,回收率为ce定值与理论值的比率。

        正常bao存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa 试剂盒回收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线xing:分别于定值血清及血浆zhongjia入襤uan╨iang的降钙素(CT)biao准品,并将biao本按1:2,1:4,1:8稀释,线xing范围ji为稀释后样本zhong降钙素(CT)hanliang的ce定值与理论值的比率。

         正常bao存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa 试剂盒回线xing检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品ce定值的变异系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:qutong一批磜en约梁衐ui低值,zhong值和高值样本进衳ie╨iang检ce,每份样本ce定20次,分别计算不tong浓度样本的平jun值和SD值。

批间差:xuanqu 3 个不tong批次的试剂盒分别dui低、zhong、高值定值样本进衳ie╨iangce定, 每个样本使用tong一试剂盒zhong复ce定 8 次,分别计算不tong浓度样本的平jun值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常bao存tiao件下you效期内和过you效期2个月elisa 试剂盒回精密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人降钙素(CT)试剂盒hui出现的wen题及解jue办法:

1. jia入反ying终止液后,没youxi光值huoxi光值偏低。

a.原因:weijia入酶biaoji物。

解jue办法:qing按照caozuo步骤进行。

b.原因:试剂盒内容物wei能充分回。

解jue办法:确定试剂盒内容物回温后再进行caozuo。

c.原因:室温太低。

解jue办法:ruo室温太低(<19),qing于caozuo步骤4,蕇hi毖映の掠奔洹Ⅻ/span>

d.原因:wei使用试剂盒的清洗液清洗。

解jue办法: qing用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒yi过you效期限。

解jue办法:qing更换成仍zaiyou效期限内的试剂盒。

2. biao譲i呦選ing不佳,huoshi平行xing不好。

a.原因:温育位置避光不好huo受到气流干扰。

解jue办法: qing确认温育位置既不透光也不透feng(如抽屉内)

b.原因:caozuo时间拖太久。

解jue办法:qingzai方法熟练后再进行caozuo。

c.原因:wei孔间相hu污染。

解jue办法: jia样品蔮ao琿ing小心勿溅出wei孔wai,以免造成其它wei孔的污染。

d.原因:biao准品huo酶biaoji物所jia入的liang瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解jue办法:qing使用yi校正过的yi液枪,并确bao其与xi头之间you高度密合xing。

e.原因:添jia样品huo试剂的caozuo方法不正确。

解jue办法:jia样品huo试剂蔮ao瑇i头qing勿jie触wei孔。

f.原因:洗板过程发生wen题(如管路堵sai、洗完板后wei立刻进行下一步骤)

解jue办法:qing随时监控洗板ji洗板过程,洗完后立ji进行下一步骤。

3. xi光值jun偏高(huo线xing不筯uan伏/span>)

a.原因:室温太高(>25)

解jue办法: ruo无法降低室内温度,qing蕇hi彼醵滩街琰/span>4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解jue办法: ruo发现底物溶液yi呈现dan蓝色,qing瞙ui偈褂谩Ⅻ/span>

c.原因:反ying时间超过太久。

解jue办法:qing控制反ying时间。

d.原因:酶biaoji物污染了盒内其它试剂。

解jue办法:使用过的xi头ying立ji丢弃,可避免试剂间相hu污染,凡shi试剂(特别shi酶biaoji物与底物溶液)jie触过的容器ying立ji清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水chong洗干净,可确bao无残liu)

4. yin衴uan曜计返膞i光值低于yang衴uan曜计返膞i光值。

a.原因:wei孔zhong的试剂wei能充分混合。

解jue办法: 试剂jia完后,需轻敲盘四周使其充分混合jun詑uⅫ/span>

b.原因:洗板过程发生wen题(tong2-f.)

解jue办法:qingcan考2-f.

c.原因:添jia样品huo酶biaoji物的liang瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解jue办法: qingcan考2-d.

 

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