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ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒

如果您dui该荣襤uai锹ji行巳さ幕?可以
荣襤uai锹济批 ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒
荣襤uai锹紉inghao: CSTA
荣襤uai锹颊股塌 ELISA试剂盒
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ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒  的详细介shao


ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒

shi用说明书

ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒基ben原理:

ben试剂盒采用双荣襤uai锹技行腅LISAfa。用抗renCSTA荣襤uai锹及挥趍ei标banshang,实验时样品或标譲i分械膔enCSTA与包被荣襤uai锹糺ie合,游li的cheng分被洗去。依次加入shengwu素化的抗renCSTA荣襤uai锹糷ela根过氧化wumei标记的亲he素。抗renCSTA荣襤uai锹加雑ie簒ian诎蝗僖huai锹約hang的renCSTAjie簒ihengwu素与亲he素te异性jie合而形cheng**fu合wu,游li的cheng分被洗去。加入xian色底wu(TMB),TMB在la根过氧化wumei的cui化xiacheng现蓝色,加终止液后变cheng黄色。用mei标yi在450nm波长chu测OD值,renCSTA浓度与OD450值之间cheng正比,tong过hui制标zhun曲线ji算出样品中renCSTA的浓度。

ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒描述:

ying文名称 Human CSTA (Cystatin A)  ELISA Kit
中文名称 ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)meilian**吸附测定试剂盒
huohao X-EL-H0147c 謟hi簏/span> Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测fangfa 双荣襤uai锹技行膄a
检测范wei 0.313~20ng/mL ling敏度 0.188ng/mL

试剂盒组cheng:

中文名称

ying文名称

规格

保存

  ELISAmei标ban(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

donggan标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标譲i饵/span>&样品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩shengwu素化荣襤uai锹稽/span>

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

shengwu素化荣襤uai锹紉i释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmeijie合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避guang)

meijie合wuxi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wurong液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避guang)

穋ongχ罩挂裹/span>

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封ban覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣襤uai锹妓得魇椟/span>

Product  Description

  1 

 

謘hi毂╣ao

Certificate of Analysis

  1 

 

tebie说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有wu品shi否齐全完整)
#: 
一zhou内shi用可存于4℃,xu长时间存放或多次shi用建议存于-20.                                      

ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒检测前zhun备工zuo:

1. 请提前20分钟congbing箱中取出试剂簒iao絟eng至室wen。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水xi释(1:25)。蝐ong猛甑姆呕?/span>4℃。congbing箱中取出的浓缩洗涤液可neng有jie晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热shijie晶完全rong解后再pei制洗涤液(加热wen度不yao超过50℃,shi用时洗涤液应wei室wen)。当日shi用。

3. 标譲i饵/span>10000×gli心1分钟,加入标譲i饵/span>&样品xi释液1.0mL至donggan标譲i分xiao艄芨牵仓曼/span>10分钟,shangxia颠倒数次,待qi充分rong解后,用移液器将qiqingqing混匀(浓度wei8000pg/mL)。然后根据xuyao进行bei比xi释(注:不yao直接在穋ongong中进行bei比xi释)。建议pei制cheng以xia浓度:an照xi释fangfa图li 标譲i饵/span>&样品xi释液直接zuowei空白kong0ng/mL。如pei制5ng/mL标譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mL的shang述标譲i芳尤牒宵/span>0.5mL标譲i饵/span>&样品xi释液的EP管謝iao煸燃纯桑琿i余浓度依此类推。 

4. shengwu素化荣襤uai锹脊uo液:实验前ji算当次实验所xu用量(以100μL/kongji),实际pei制时应多pei制100-200μL。shi用前15分钟,以shengwu素化荣襤uai锹紉i释液xi释浓缩shengwu素化荣襤uai锹稽/span>(1:100)cheng工zuo浓度。当日shi用。

5. meijie合wu工zuo液:实验前ji算当次实验所xu用量(以100μL/kongji),实际pei制时应多pei制100-200μL。shi用前15分钟,以meijie合wuxi释液xi释浓缩HRPmeijie合wu(1:100)cheng工zuo浓度。

当日shi用。

ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒标譲i穢i释fangfa图li:(以500μL/管weili,也可根据实际用量来xi释,如200μL/管)

            

1. 在各kong中加入标譲i坊蜓犯鳇/span>100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μshengwu素化荣襤uai锹脊uo液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μLmeijie合wu工zuo液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底wurong液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长chu测量OD

8. jie果ji算

一、caozuo因素duiELISAjie果的yingxiangELISAcaozuo步骤fu杂,caozuo瞙uai苯餵iao大的误差。以xia叙述各个步骤中的yingxiang因素。

1.加样

2.wen育

3.洗涤

4.xian色

5.比色

二、粂i纳柚胻ong常情况xia,ELISA定性实验以“阳性”he“阴性”来报gaojie果,liang者间有一tiao分jie线被称wei“阳性判duan值”(cut-off valueCO值),这shi定性**测定jie果报gao的依据。

三、标benfu查ELISA手工检测过chengfu杂,yingxiang因素jiao多,即shi室内zhi控在控,也可neng因kong间差异而造chengjie果的差异,因此加大fu查力度shi保证jie果zhun确性的可kaofangfa,比如duiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等xiang目的可疑、弱阳性标ben及少见模式的检测jie果进行fu查。

四、jie果判duanhe报gao常用xia列ji种fangfa表shijie果:

1.定性测定

2.半定量测定 jie果一般以di度表shi。

3.定量测定 糲ong靡阎康谋曜ji穤uo一系列xi释后进行ELISA测定,hui制标zhun曲线,jie果以优良量或单位表shi。在ELISA定量检测中每一块穋ongan都必须hui制相应的标zhun曲线。

注意事xiang:

zi细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检查试剂盒标签shang的有效期。如果超过有效期,请勿shi用。

an说明书确定所有试剂齐全(数量、体积)。

标ben制备yao规范,每份标ben体积yaoan2-3个fukong以shang的量制备(zhu存),尽量分装做备份。短期内无fa实验者,注意低wen保存。

zhun备好所有实验额外所xuwu品,(比如移液器,试管,清洗器,mei标yi)。

an说明书将所用试剂平heng至室wen,根据检测标ben数量确定所xu试剂的量。

检查试剂盒内每謟hi约恋膠hu存tiao件,保证所有试剂junan照试剂盒内说明书推jian的tiao件存储。

检查不稳定或者变zhi的试剂rong液(比如沉淀或变色)。有xie试剂,比如标譲i穢i释液或者检测xi释液,可neng在设ji蔮en秃谐恋韜u。所有试剂在di入mei标ban之前,必xu充分混匀。而由于沉淀wu的te性,在加入mei标ban之前,必xu不停搅拌。

保证充分的孵育时间hewen度。

切勿shi用不tongsheng产批hao的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

在混合或rong解蛋白rong液时,避免泡沫产sheng。

在实验开shi之前,安排好实验流cheng。

在实验开shi之前,清洁工zuo台。

若有问ti,应与wo公司或代理商的技shu支持lian系

ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒jie果判duan:

1. 每个标譲i返命/span>OD值减去空白kong的OD值后zuo图,如设置fukong,ze应取qi平jun值ji算。以标譲i返呐ǘ葁ei横坐标,OD謉i葑辏琱ui出标zhun曲线。亦可以OD謉i嶙辏曜ji返呐ǘ葁ei纵坐标,hui出标zhun曲线。

2. 推jianshi用专业的曲线制zuo软件,如curve expert 1.31.4,在软件jie面既可根据样品OD值,由标zhun曲线查出相应的浓度,乘以xi释bei数;亦可将样品的OD值代入标zhun曲线的拟合fangcheng式,ji算出样品浓度,再乘以xi释bei数,即wei样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标zhun曲线shang限,应适当xi释后重测,ji算浓度时应乘以xi释bei数。 

ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒有效期稳定性考察

ben试验以半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)weili

1.        OD值:

正常保存tiao件xia有效期内he超过有效期2个月所测OD值比jiao

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分bie于定值血清及血浆中加入一定量的半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)标譲i罚豧u测定并ji算qi品jun值,回收率wei测定值与理论值的比率。

        正常保存tiao件xia有效期内he过有效期2个月elisa 试剂盒回收聅hi觳鈐ie果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分bie于定值血清及血浆中加入一定量的半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)标譲i罚⒔阞enan1:2,1:4,1:8xi释,线性范wei即weixi释后样ben中半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)含量的测定值与理论值的比率。

         正常保存tiao件xia有效期内he过有效期2个月elisa 试剂盒回线性检测jie果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品测定值的变异系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取tong一批次试剂盒dui低值,中值he高值样ben进行定量检测,每份样ben测定20次,分bieji算不tong浓度样ben的平jun值heSD值。

批间差:选取 3 个不tong批次的试剂盒分biedui低、中、高值定值样ben进行定量测定, 每个样benshi用tong一试剂盒重fu测定 8 次,分bieji算不tong浓度样ben的平jun值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存tiao件xia有效期内he过有效期2个月elisa 试剂盒回精密度检测jie果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

ren半胱氨酸蛋白mei抑制剂(CSTA)试剂盒hui出现的问ti及解决办fa:

1. 加入穋ongχ罩挂汉螅琺ei有吸guang值或吸guang值偏低。

a.原因:wei加入mei标记wu。

解决办fa:请an照caozuo步骤进行。

b.原因:试剂盒内容wuweineng充分回。

解决办fa:确定试剂盒内容wu回wen后再进行caozuo。

c.原因:室wentai低。

解决办fa:若室wentai低(<19),请于caozuo步骤4,适当yan长wen育时间。

d.原因:weishi用试剂盒的清洗液清洗。

解决办fa: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过有效期限。

解决办fa:请更换cheng仍在有效期限内的试剂盒。

2. 标zhun曲线线性不佳,或shi平行性不好。

a.原因:wen育位置避guang不簃ei蚴艿狡鱣an扰。

解决办fa: 请确认wen育位置既不touguang也不tou风(如抽屉内)

b.原因:caozuo时间拖taijiu。

解决办fa:请在fangfa熟练后再进行caozuo。

c.原因:微kong间相huwu染。

解决办fa: 加样品时,请小心勿溅出微kong外,以免造chengqita微kong的wu染。

d.原因:标譲i坊騧ei标记wu所加入的量不一致。

解决办fa:请shi用已xiao正过的移液枪,并确保qi与吸tou之间有高度密合性。

e.原因:添加样品或试剂的caozuofangfa不正确。

解决办fa:加样品或试剂时,吸tou请勿接触微kong。

f.原因:洗ban过cheng发sheng问ti(如管路堵塞、洗完ban后wei立刻进行xia一步骤)

解决办fa:请随时监控洗ban机洗ban过cheng,洗完后立即进行xia一步骤。

3. 吸guang值jun偏高(或线性不够陡)

a.原因:室wentai高(>25)

解决办fa: 若无fa降低室内wen度,请适当缩短步骤4的wen育时间。

b.原因:底wurong液受到wu染。

解决办fa: 若发现底wurong液已cheng现淡蓝色,请不yao再shi用。

c.原因:穋ongκ奔涑齮aijiu。

解决办fa:请控制穋ongκ奔洹Ⅻ/span>

d.原因:mei标记wuwu染liao盒内qita试剂。

解决办fa:shi用过的吸tou应立即丢弃,可避免试剂间相huwu染,凡shi试剂(tebieshimei标记wu与底wurong液)接触过的容器应立即清洗gan净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗gan净,可确保无残留)

4. 阴性标譲i返奈黦uang值低于阳性标譲i返奈黦uang值。

a.原因:微kong中的试剂weineng充分混簒iⅫ/span>

解决办fa: 试剂加完后,xuqing敲盘四zhoushiqi充分混合jun匀。

b.原因:洗ban过cheng发sheng问ti(tong2-f.)

解决办fa:请参考2-f.

c.原因:添加样品或mei标记wu的量不一致。

解决办fa: 请参考2-d.

 

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