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人脂蛋白a(LP-a)试剂盒

如guonin对gai荣yi登录竫ing巳さ幕?可yi
荣yi登录名称: 人脂蛋白a(LP-a)试剂盒
荣yi登录xing号: LP-a
荣yi登录展商: ELISA试剂盒
荣yi登录wendang: 无xiang关wendang

简单介绍

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人脂蛋白a(LP-a)试剂盒  的详细介绍


人脂蛋白a(LP-a)试剂盒

使用说明书

人脂蛋白a(LP-a)试剂盒基ben原理:

ben试剂盒采用shuang荣yi登录紉ing腅LISA法。用抗人LP-a荣yi登录包bei于酶标板上,实验shi样品或标准品中的人LP-ayu包bei荣yi登录结合,you离的cheng分bei洗qu。依ci加入sheng物素化的抗人LP-a荣yi登录和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人LP-a荣yi登录yu结合在包bei荣yi登录上的人LP-a结合、sheng物素yu亲和素特异xing结合而xingcheng**复合物,you离的cheng分bei洗qu。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的cui化下呈现蓝色,加终zhiye后biancheng黄色。用酶标仪在450nm波长chu测OD值,人LP-a浓duyuOD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人LP-a的浓du。

人脂蛋白a(LP-a)试剂盒描述:

yingwen名称 Human LP-a (Lipoprotein a) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 人脂蛋白a(LP-a)酶联**吸附测ding试剂盒
huo号 X-EL-H0160c 謟hi簏/span> Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuang荣yi登录紉ing姆?/span>
检测范围 0.234~15ng/mL 灵mindu 0.141ng/mL

试剂盒zucheng:

謝ing拿劈/span>

yingwen名称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀shiye

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物素化荣yi登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化荣yi登录稀shiye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀shiye

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗diye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(避光)

反ying终zhiye

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

feng板覆mo

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣yi登录说明书

Product  Description

  1 

 

zhi检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请及shi检查所觴ing锲肥欠衿肴暾?/span>
#: 
yi周na使用可存于4℃,xu长shi间存fang或多ci使用jian议存于-20.                                      

人脂蛋白a(LP-a)试剂盒检测qian准备工作:

1. 请提qian20分钟从冰箱中qu出试剂盒,ping衡至室温。

2. jiang浓缩洗diye用shuang蒸水稀shi(1:25)。未用完的fang回4℃。从冰箱中qu出的浓缩洗diye可neng有结晶,属于正常现xiang,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶jie后再配制洗diye(加热温du不要超过50℃,使用shi洗diyeying为室温)。当日使用。

3. 标准品10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀shiye1.0mL至冻干标准品中,xuan紧guan盖,静置10分钟,上下颠倒shuci,daiqi充分溶jie后,用yiye器jiangqi轻轻混匀(浓du为8000pg/mL)。ran后根据xu要进xing倍比稀shi(注:不要直接在反ying孔中进xing倍比稀shi)。jian议配制chengyi下浓du:按照稀shi方法图例 标准品&样品稀shiye直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:qu0.5mL10ng/mL的上述标准品加入han有0.5mL标准品&样品稀shiye的EPguan中,混匀即可,qi余浓du依磗i嗤啤Ⅻ/span> 

4. sheng物素化荣yi登录工作ye:实验qian计算当ci实验所xu用量(yi100μL/孔计),实际配制shiying多配制100-200μL。使用qian15分钟,yisheng物素化荣yi登录稀shiye稀shi浓缩sheng物素化荣yi登录(1:100)cheng工作浓du。当日使用。

5. 酶结合物工作ye:实验qian计算当ci实验所xu用量(yi100μL/孔计),实际配制shiying多配制100-200μL。使用qian15分钟,yi酶结合物稀shiye稀shi浓缩HRP酶结合物(1:100)cheng工作浓du。

当日使用。

人脂蛋白a(LP-a)试剂盒标准品稀shi方法图例:(yi500μL/guan为例,也可根据实际用量来稀shi,如200μL/guan)

            

1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μsheng物素化荣yi登录工作ye,37℃孵育60分钟

3. 洗di3ci

4. 加入100μL酶结合物工作ye, 37℃孵育30分钟

5. 洗di5ci

6. 加入90μL底物溶ye, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终zhiye,立即在450nm波长chu测量OD

8. 结guo计算

yi、操作因素对ELISA结guo的影响ELISA操作步zhou复杂,操作不当jiang引起较大的误差。yi下xu述各个步zhou中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗di

4.显色

5.比色

二、灰区的设置通常情况下,ELISAdingxing实验yi“阳xing”和“阴xing”来报告结guo,liangzhe间有yi条分界线bei称为“阳xing舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),这是dingxing**测ding结guo报告的依据。

三、标ben复查ELISA蕑hiぜ觳夤谈丛樱跋煲蛩亟隙啵词故襫azhi控在控,也可neng因孔间差异而造cheng结guo的差异,因此加大复查lidu是保证结guo准确xing的可靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdeng项目的可疑、弱阳xing标ben及少见模蔶iang募觳饨醙uo进xing复查。

si、结guo舩ie虾捅ǜ娉S孟铝屑钢zhi椒ū硎窘醙uo:

1.dingxing测ding

2.banding量测ding 结guoyibanyididu表示。

3.ding量测ding 即用已知量的标准品作yi系列稀shi后进xingELISA测ding,绘制标准曲线,结guoyiyou良量或单位表示。在ELISAding量检测中每yi块反ying板都必须绘制xiangying的标准曲线。

注意事项:

仔细yue秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检查试剂盒标签上的觴ing凇H鏶uo超过觴ing冢胛鹗褂谩Ⅻ/span>

按说明书确ding所有试剂齐全(shu量、体积)。

标ben制备要规范,每份标ben体积要按2-3个复孔yi上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期na无法实验zhe,注意低温保存。

准备好所有实验ewai所xu物品,(比如yiye器,试guan,清洗器,酶标仪)。

按说明书jiang所用试剂ping衡至室温,根据检测标benshu量确ding所xu试剂的量。

检查试剂盒na每謟hi约恋闹嫣跫Vに惺约羓un按照试剂盒na说明书推荐的条件存储。

检查不稳ding或zhebianzhi的试剂溶ye(比如沉淀或bian色)。觴ing┦约粒热绫曜计废hiye或zhe检测稀shiye,可neng在设计蔮en蚳an有沉淀物。所有试剂在di入酶标板之qian,必xu充分混詑u6捎诔恋砦锏奶豿ing,在加入酶标板之qian,必xu不停搅拌。

保证充分的孵育shi间和温du。

莤ing鹗褂貌煌瑂heng产pi号的试剂qu代现有试剂或混合现有试剂。

在混合或溶jie蛋白溶yeshi,避免泡沫产sheng。

在实验开始之qian,安排好实验流程。

在实验开始之qian,清jie工作台。

若觴ing侍猓瑈ingyuwo公si或代理商的技术支持联系

人脂蛋白a(LP-a)试剂盒结guo舩ie吸/span>:

1. 每个标准品的OD值jianqu空白孔的OD值后作图,如设置复孔,则yingquqipingjun值计算。yi标准品的浓du为heng坐标,OD謉i葑辏娉霰曜记摺i可yiOD謉i猦eng坐标,标准品的浓du为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用zhuan襠ang那咧谱魅砑纥/span>curve expert 1.31.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标准曲线查出xiangying的浓du,乘yi稀shi倍shu;yi可jiang样品的OD值代入标准曲线的ni合方程式,计算出样苀ang╠u,再乘yi稀shi倍shu,糲i返氖导逝╠u。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,ying适当稀shi后重测,计算浓dushiying乘yi稀shi倍shu。 

脂蛋白a(LP-a)试剂盒觴ing谖萪ingxing考察

ben试验yi脂蛋白a(LP-a)为例

1.        OD值:

正常保存条件下觴ing趎a和超过觴ing冱/span>2个月所测OD值比较

正常觴ing趎aOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月觴ing冱/span>OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于ding值血清及血浆中加入yiding量的脂蛋白a(LP-a)标准品,重复测ding并计算qi品jun值,回收率为测ding謉i肜砺壑dang谋嚷省Ⅻ/span>

        正常保存条件下觴ing趎a和过觴ing冱/span>2个月elisa 试剂盒回收率检测结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线xing:分别于ding值血清及血浆中加入yiding量的脂蛋白a(LP-a)标准品,并jiang标ben按1:2,1:4,1:8稀shi,线xing范围糲ihi后样ben中脂蛋白a(LP-a)han量的测ding謉i肜砺壑dang谋嚷省Ⅻ/span>

         正常保存条件下觴ing趎a和过觴ing冱/span>2个月elisa 试剂盒回线xing检测结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密du:yi样品测ding謉ang腷ian异系shuCV表示。CV%=SD/meanx100

pina差:qu同yipici试剂簒ie缘椭担兄岛透咧笛鵥en进xingding量检测,每份样ben测ding20ci,分别计算不同浓du样ben的pingjun值和SD值。

pi间差:选qu 3 个不同pici的试剂盒分别对低、中、高值ding值样ben进xingding量测ding, 每个样ben使用同yi试剂盒重复测ding 8 ci,分别计算不同浓du样ben的pingjun值及 SD 值。(pina差: CV<10%;pi间差: CV<11%)

       正常保存条件下觴ing趎a和过觴ing冱/span>2个月elisa 试剂盒回精密du检测结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人脂蛋白a(LP-a)试剂盒hui出现的问题及jiejue办法:

1. 加入反ying终zhiye后,没觴ing庵祷蛭庵灯汀Ⅻ/span>

a.原因:未加入酶标记物。

jiejue办法:请按照操作步zhou进xing。

b.原因:试剂盒na容物未neng充分回。

jiejue办法:确ding试剂盒na容物回温后再进xing操作。

c.原因:室温太低。

jiejue办法:若室温太低(<19),请于操作步zhou4,适当延长温育shi间。

d.原因:未使用试剂盒的清洗ye清洗。

jiejue办法: 请用试剂盒na所提供的清洗ye清洗。

e.原因:试剂盒已过觴ing谙蕖Ⅻ/span>

jiejue办法:请更换cheng仍在觴ing谙辬a的试剂盒。

2. 标准曲线线xing不佳,或是pingxingxing不好。

a.原因:温育位置避光不好或受到气流干扰。

jiejue办法: 请确认温育位置既不透光也不透feng(如抽屉na)

b.原因:操作shi间拖太久。

jiejue办法:请在方法熟lian后再进xing操作。

c.原因:微孔间xiang互污染。

jiejue办法: 加样品shi,请小心勿溅出微孔wai,yi免造chengqita微孔的污染。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不yi致。

jiejue办法:请使用已校正过的yiyeqiang,并确保qiyu吸头之间有高du密合xing。

e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。

jiejue办法:加样品或试剂shi,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板过程发sheng问题(如guan路堵塞、洗完板后未立ke进xing下yi步zhou)

jiejue办法:请随shijian控洗板机洗板过程,洗完后立即进xing下yi步zhou。

3. 吸光值jun偏高(或线xing不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

jiejue办法: 若无法jiang低室na温du,请适当缩短步zhou4的温育shi间。

b.原因:底物溶ye受到污染。

jiejue办法: 若发现底物溶ye已呈现淡蓝色,请不要再使用。

c.原因:反yingshi间超过太久。

jiejue办法:请控制反yingshi间。

d.原因:酶标记物污染liao盒naqita试剂。

jiejue办法:使用过的吸头ying立即丢qi,可避免试剂间xiang互污染,凡是试剂(特别是酶标记物yu底物溶ye)接触过的容器ying立即清洗干净。(先yipiao白水浸泡,再yi清水冲洗干净,可确保无残留)

4. 阴xing标准品的吸光謉ang陀谘魓ing标准品的吸光值。

a.原因:微孔中的试剂未neng充分混合。

jiejue办法: 试剂加完后,xu轻敲盘si周使qi充分混合jun詑uⅫ/span>

b.原因:洗板过程发sheng问题(2-f.)

jiejue办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量不yi致。

jiejue办法: 请参考2-d.

 

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