rong襤uai锹甲柿吸/div>

人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒

如果您对该rong襤uai锹几行巳さ膆ua,可以
rong襤uai锹济批 人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒
rong襤uai锹jia秃您 5-LO
rong襤uai锹紌han商: ELISA试剂盒
rong襤uai锹嘉膁ang: wu相关文dang

简dan介绍

威尼斯app官网下载


人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒  的详细介绍


人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒

使yong说明书

人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒基本原理:

本试剂盒caiyong双rong襤uai锹糺ia心ELISAfa。yong抗人5-LOrong襤uai锹糱ao被于酶标板上,实验时样品或标譲i分械娜?-LO与bao被rong襤uai锹冀醜e,游li的成分被洗去。依次加入生wusu化的抗人5-LOrong襤uai锹己屠备齳ang化wu酶标记的亲和su。抗人5-LOrong襤uai锹加虢醜e在bao被rong襤uai锹忌系娜?-LO结he、生wusu与亲和sute异性结he而形成**复hewu,游li的成分被洗去。加入显色底wu(TMB),TMB在辣根过yang化wu酶的催化下cheng现蓝色,加终止液后变成黄色。yong酶标仪在450nm波长处测OD值,人5-LO浓度与OD450值之间硈hou龋ü嬷票曜记遤i算chu样品中人5-LO的浓度。

人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒miao述:

英文名称 Human 5-LO (Arachidonate 5-Lipoxygenase) ELISA Kit
中文名称 人5脂加yang酶(5-LO)酶lian**吸附测定试剂盒
货号 X-EL-H0223c 种属 Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测fangfa 双rong襤uai锹糺ia心fa
检测范围 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒组成:

中文名称

英文名称

规ge

保存

  ELISA酶标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标譲i饵/span>&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓suo生wusu化rong襤uai锹稽/span>

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生wusu化rong襤uai锹枷∈鸵裹/span>

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoHRP酶结hewu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结hewu稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suo洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

rong襤uai锹妓得魇椟/span>

Product  Description

  1 fen

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

tebie说明
*: [96T/48T](打kaibao装后qing及时检chasuo有wu品shi否齐全完整)
#: 
一zhou内使yong可存于4℃,需长时间存放或duo磜en箉ong建议存于-20.                                      

人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒检测前准备工作:

1. qing提前20分钟从冰箱中取chu试剂盒,平衡zhi室温。

2. 将浓suo洗涤液yong双蒸水稀释(1:25)。未yong完的放回4℃。从冰箱中取chu的浓suo洗涤液可能有结晶,属于正chang现xiang,可yong40℃水浴wei加热使结晶完全溶解后zai配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使yong时洗涤液应为室温)。当日使yong。

3. 标譲i饵/span>10000×gli心1分钟,加入标譲i饵/span>&样品稀释液1.0mLzhi冻干标譲i分校艄芨牵琷ingzhi10分钟,上下颠倒数次,daiqi充分溶解后,yongyi液qi将qiqingqinghun匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍眗en∈停ㄗⅲ翰灰眏ie在反应kong中进行倍眗en∈停=ㄒ榕渲瞥梢韵屡ǘ龋喊凑障∈蚮angfa图例 标譲i饵/span>&样品稀释液直jie作为空白kong0ng/mL。如配制5ng/mL标譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mL的上述标譲i芳尤牒宵/span>0.5mL标譲i饵/span>&样品稀释液的EP管中,hun匀ji可,qi余浓度依磗i鄑ui。 

4. 生wusu化rong襤uai锹脊ぷ饕海菏笛榍癹i算当磜en笛閟uo需yongliang(以100μL/kongji),实际配制时应duo配制100-200μL。使yong前15分钟,以生wusu化rong襤uai锹枷∈鸵he∈团╯uo生wusu化rong襤uai锹稽/span>(1:100)成工作浓度。当日使yong。

5. 酶结hewu工作液:实验前ji算当磜en笛閟uo需yongliang(以100μL/kongji),实际配制时应duo配制100-200μL。使yong前15分钟,以酶结hewu稀释襤e∈团╯uoHRP酶结hewu(1:100)成工作浓度。

当日使yong。

人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒标譲i废∈蚮angfa图例:(以500μL/管为例,ye可根据实际yongliang来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各kong中加入标譲i坊蜓犯鳇/span>100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生wusu化rong襤uai锹脊ぷ饕海?/span>37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结hewu工作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底wu溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终止液,立ji在450nm波长处测liangOD

8. 结果ji算

一、cao作因su对ELISA结果的影响ELISAcao作buzhou复杂,cao作瞙uai苯鸾洗蟮奈蟛睢R韵滦鹗龈鞲鯾uzhou中的影响因su。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰qu的设zhi通changqing况下,ELISA定性实验以“yang性”和“阴性”来报告结果,两者间有一tiao分jie线被称为“yang性舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),zheshi定性**测定结果报告的依据。

三、标本复chaELISA手工检测过程复杂,影响因su较duo,ji使室内质kong在kong,ye可能因kong间差异而造成结果的差异,因此加大复cha力度shi保证结果准确性的可kaofangfa,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康目梢伞⑷鮵ang性标本及少见模式的检测结果进行复cha。

四、结果舩ie虾捅ǜ鎐hangyong下lie几种fangfa表shi结果:

1.定性测定

2.半定liang测定 结果襤ua阋缘味缺韘hi。

3.定liang测定 jiyong已知liang的标譲i纷饕幌祃ie稀释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以you良liang或dan位表shi。在ELISA定liang检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。

注意事项:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检cha试剂盒标qian上的有xiao期。如果超过有xiao期,qing勿使yong。

按说明书确定suo有试剂齐全(数liang、体积)。

标本制备要规范,每fen标本体积要按2-3个复kong以上的liang制备(zhu存),尽liang分装做备fen。短期内wufa实验者,注意低温保存。

准备好suo有实验额waisuo需wu品,(比如yi液qi,试管,清洗qi,酶标仪)。

按说明书将suoyong试剂平衡zhi室温,根据检测标本数liang确定suo需试剂的liang。

检cha试剂盒内每种试剂的zhu存tiao件,保证suo有试剂jun按照试剂盒内说明书tui荐的tiao件存储。

检cha不稳定或者变质的试剂溶液(比如沉淀或变色)。有些试剂,比如标譲i废∈鸵夯蛘呒觳庀∈鸵海赡茉谏鑚i时就含有沉淀wu。suo有试剂在滴入酶标板之前,必需充分hun匀。而you于沉淀wu的te性,在加入酶标板之前,必需不停搅拌。

保证充分的孵育时间和温度。

切勿使yong不同生产批号的试剂取dai现有试剂或hunhe现有试剂。

在hunhe或溶解dan白溶液时,bi免paomo产生。

在实验kai始之前,安排好实验流程。

在实验kai始之前,清jie工作台。

若有wen题,应与我公薺ing騞ai理商的技术支持lian系

结果舩ie吸/span>:

1. 每个标譲i返命/span>OD值jian去空白kong的OD值后作图,如设zhi复kong,则应取qi平jun值ji算。以标譲i返呐ǘ任醶uo标,OD值为纵zuo标,绘chu标准曲线。亦可以OD值为横zuo标,标譲i返呐ǘ任輟uo标,绘chu标准曲线。

2. tui荐使yong专襠ang那咧谱魅砑纥/span>curve expert 1.31.4,在软件jiemian既可根据样品OD值,you标准曲线chachu相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的OD值dai入标准曲线的拟hefang程式,ji算chu样品浓度,zai乘以稀释倍数,ji为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应shi当稀释后重测,ji算浓度时应乘以稀释倍数。 

5脂加yang酶(5-LO)试剂盒有xiao期稳定性考察

本试验以5脂加yang酶(5-LO)为例

1.        OD值:

正chang保存tiao件下有xiao期内和超过有xiao期2个月suo测OD值比较

正chang有xiao期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有xiao期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:分bie于定值血清及血浆中加入一定liang的5脂加yang酶(5-LO)标譲i罚馗床舛úi算qi品jun值,回shou率为测定值与理lun謉ang谋嚷省Ⅻ/span>

        正chang保存tiao件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa 试剂盒回shou率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分bie于定值血清及血浆中加入一定liang的5脂加yang酶(5-LO)标譲i罚⒔瓯景滁/span>1:2,1:4,1:8稀释,线性范围ji为稀释后样本中5脂加yang酶(5-LO)含liang的测定值与理lun謉ang谋嚷省Ⅻ/span>

         正chang保存tiao件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa 试剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        jingmi度:以样品测定謉ang谋湟煜凳?/span>CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批磜en约梁xie缘椭担兄岛tou咧笛窘xie╨iang检测,每fen样眏ing舛?/span>20次,分bieji算不同浓度样本的平jun值和SD值。

批间差:选取 3 个不同批次的试剂盒分bie对低、中、高值定值样本进衳ie╨iang测定, 每个样本使yong同一试剂盒重复测定 8 次,分bieji算不同浓度样本的平jun值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正chang保存tiao件下有xiao期内和过有xiao期2个月elisa 试剂盒回jingmi度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人5脂加yang酶(5-LO)试剂盒会chu现的wen题及解决办fa:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记wu。

解决办fa:qing按照cao作buzhou进行。

b.原因:试剂盒内容wu未能充分回。

解决办fa:确定试剂盒内容wu回温后zai进行cao作。

c.原因:室温太低。

解决办fa:若室温太低(<19),qing于cao作buzhou4,shi当延长温育时间。

d.原因:未使yong试剂盒的清洗液清洗。

解决办fa: qingyong试剂盒内suo提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过有xiao期限。

解决办fa:qing更换成reng在有xiao期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或shi平行性不好。

a.原因:温育位zhibi光不好或shoudao气流干扰。

解决办fa: qing确ren温育位zhi既不tou光ye不tou风(如抽屉内)

b.原因:cao作时间拖太jiu。

解决办fa:qing在fangfashu练后zai进行cao作。

c.原因:weikong间相互wuran。

解决办fa: 加样品时,qing小心勿溅chuweikongwai,以免造成qi它weikong的wuran。

d.原因:标譲i坊蛎副昙莣usuo加入的liang不一致。

解决办fa:qing使yong已校正过的yi液qiang,并确保qi与吸头之间有高度mihe性。

e.原因:添加样品或试剂的cao作fangfa不正确。

解决办fa:加样品或试剂时,吸头qing勿jiechuweikong。

f.原因e窗骞谭⑸鷚en题(如管路dusai、洗完板后未立刻进行下一buzhou)

解决办fa:qing随时jiankong洗板机洗板过程,洗完后立ji进行下一buzhou。

3. 吸光值jun偏高(或线性不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办fa: 若wufa絛ang褪夷谖露龋琿ingshi当suo短buzhou4的温育时间。

b.原因:底wu溶液shoudaowuran。

解决办fa: 若发现底wu溶液已cheng现淡蓝色,qing不要zai使yong。

c.原因:反应时间超过太jiu。

解决办fa:qingkong制反应时间。

d.原因:酶标记wuwuranliao盒内qi它试剂。

解决办fa:使yong过的吸头应立ji丢弃,可bi免试剂间相互wuran,凡shi试剂(tebieshi酶标记wu与底wu溶液)jiechu过的容qi应立ji清洗干jing。(先以漂白水浸pao,zai以清水冲洗干jing,可确保wu残留)

4. 阴性标譲i返奈庵dang陀趛ang性标譲i返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原因:weikong中的试剂未能充分hunhe。

解决办fa: 试剂加完后,需qing敲盘四zhou使qi充分hunhejun匀。

b.原因e窗骞谭⑸鷚en题(2-f.)

解决办fa:qing参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记wu的liang不一致。

解决办fa: qing参考2-d.

 

rong襤uai锹剂粞狱/b>
标题
lian系人
lian蟙ang鏷ua
内容
验证码
点ji换一张
注:1.可以使yong快捷键Alt+S或Ctrl+Enter发送信息!
2.如有必要,qing您留下您的详细lian系fang式!