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大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联免疫吸附检测shiji盒

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荣一登录名称: 大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联免疫吸附检测shiji盒
荣一登耲ia秃您 CABIN1
荣一登录展商: ELISAshiji盒
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简单介绍

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大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联免疫吸附检测shiji盒  的详细介绍

大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联**吸附检测shiji盒

使用shuomingshu

yu期ying用

本shiji盒运用双荣一登录jia心ELISAfading量测ding大鼠血清、血jiang、组织匀jiang、细胞裂解液、细胞培yangshang清液簍ui渌镆禾逯懈频鱨in酸酶jie合蛋白1(CABIN1)含量。

大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联**吸附检测shiji盒基本原理:

本shiji盒采用双荣一登录jia心ELISAfa。用抗大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)荣一登录包被yu酶biao板shang,实yan时样品或biao准品中的大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)与包被荣一登录jie合,游li的成分被洗去。襩ai渭尤肷锼鼗mu勾笫蟾频鱨in酸酶jie合蛋白1(CABIN1)荣一登录和la根过氧化物酶biao记的亲和素。抗大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)荣一登录与jie合在包被荣一登录shang的大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)jie合、生物素与亲和素teyi性jie合而形成**fu合物,游li的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在la根过氧化物酶的cui化xiacheng现蓝色,加终止液后bian成黄色。用酶biao仪在450nm波chang处测OD值,大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)浓度与OD450值之间cheng正比,通过绘制biao准qu线计算出样品中大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)的浓度。

描述:

yingwen名称 Rat CABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit
中wen名称 大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联**吸附测dingshiji盒
货号 X-EL-R0133c 种shu Rat/大鼠
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方fa 双荣一登录jia心fa
检测fan围 0~ 灵敏度 0

组成:

中wen名称

yingwen名称

规ge

保存

  ELISA酶biao板(可chaixie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

biao准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化荣一登录稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶jie合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(bi光)

酶jie合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

feng板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣一登录shuomingshu

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

te别shuoming
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所you物品是fuqi全完整)
#: 
一周内使用可存yu4℃,xuchang时间存放或duo次使用建议存yu-20.                                      

大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联**吸附检测shiji盒检测前准备工zuo:

1. 请ti前20分钟从bingxiang中取出shiji簒iao胶庵潦椅long

2. 将浓缩洗涤液用双zheng水稀释(1:25)。wei用完的放回4℃。从bingxiang中取出的浓缩洗涤液可能youjiejing,shuyu正chang现象,可用40℃水yu微加热使jiejing完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液ying为室温)。当日使用。

3. biao准品: yu10000×gli心1分钟,加入biao准品&样品稀释液1.0mL至冻干biao准品謝iao艄躦ai,静置10分钟,shangxia颠倒数次,待qi充分溶解后,用移液器将qi轻轻混匀(浓度为)。然后根juxu要进行倍比稀蕋ingㄗⅲ翰灰苯釉诜磞ing孔中进行倍比稀蕋ing=ㄒ榕渲瞥梢詘ia浓度:按照稀释方fa图例 biao准品&样品稀释液直接zuo为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao准品:取0.5mL10ng/mL的shang述biao准品加入含you0.5mLbiao准品&样品稀释液的EP管謝iao煸燃纯桑琿i余浓度襩ai薼eitui。 

4. 生物素化荣一登录工zuo液:实yan前计算当次实yan所xu用量(以100μL/孔计),实际配制时yingduo配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化荣一登录稀释液稀释浓缩生物素化荣一登录(1:100)成工zuo浓度。当日使用。

5. 酶jie合物工zuo液:实yan前计算当次实yan所xu用量(以100μL/孔计),实际配制时yingduo配制100-200μL。使用前15分钟,以酶jie合物稀释液稀释浓缩HRP酶jie合物(1:100)成工zuo浓度。

当日使用。

大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联**吸附检测shiji盒biao准品稀释方fa图例:(以500μL/管为例,也可根ju实际用量lai稀蕋ing?00μL/管)

1.使用前将所you的shiji和biao本缓慢均衡至室温(18-25oC),shiji不能直接在37oC溶解。

2.biao准品(冻干品):每瓶biao准品加入biao准品稀释液1mL,gai好后室温静置大yue10分钟,同时反fu颠倒/cuo动以助溶解,qi浓度为8000pg/mL。准备7ge稀释biao准品的EP管,每geEP管中加入500μL的biao准品稀释液,如图所示襩ai伪侗认∈ting琤iao准品稀释液(0pg/mL)直接zuo为空白孔。为保证实yanjie果you效性,每次实yan请使用新的biao准品溶液。

      

1. 在各孔中加入biao准品或样品各100μL, 37℃fu育90分钟

2. 加入100μL 生物素化荣一登录工zuo液,37℃fu育60分钟

3. 洗涤3次

4. 加入100μL酶jie合物工zuo液, 37℃fu育30分钟

5. 洗涤5次

6. 加入90μL底物溶液, 37℃fu育15分钟左右

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波chang处测量OD值

8. jie果计算

一、操zuo因素对ELISAjie果的影响ELISA操zuo步骤fuza,操zuo不当将引起较大的误差。以xia叙述各ge步骤中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

er、灰区的she置通chang情况xia,ELISAding性实yan襶u皔ang衴u焙汀耙跣yu眑ai报告jie果,两者间you一条分界线被称为“yang性舩ie现怠保╟ut-off value,CO值),这是ding性**测dingjie果报告的依ju。

三、biao本fu查ELISAshou工检测过程fuza,影响因素较duo,即使室内质控在控,也可能因孔间差yi而造成jie果的差yi,因此加大fu查力度是保证jie果准que性祄u煽糠絝a,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等xiangmu祄u梢伞⑷鮵ang性biao本及少见模式的检测jie果进行fu查。

四、jie果舩ie虾捅ǜ鎐hang用xia列几种方fa表示jie果:

1.ding性测ding

2.半ding量测ding jie果一般以di度表示。

3.ding量测ding 即用已知量的biao准品zuo一系列稀释后进行ELISA测ding,绘制biao准qu线,jie果以you羓i炕虻ei表示。在ELISAding量检测中每一块反ying板都必须绘制相ying的biao准qu线。

大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联**吸附检测shiji盒会出现的问题及解决办fa:

1. 加入反ying终止液后,meiyou吸光值或吸光值偏低。

a.原因:wei加入酶biao记物。

解决办fa:请按照操zuo步骤进行。

b.原因:shiji盒内容物wei能充分回。

解决办fa:quedingshiji盒内容物回温后再进行操zuo。

c.原因:室温太低。

解决办fa:若室温太低(<19℃),请yu操zuo步骤4,shi当延chang温育时间。

d.原因:wei使用shiji盒的清洗液清洗。

解决办fa: 请用shiji盒内所tigong的清洗液清洗。

e.原因:shiji盒已过you效期限。

解决办fa:请更换成仍在you效期限内的shiji盒。

2. biao准qu线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育wei置bi光不簃ei蚴艿狡鞲扇拧

解决办fa: 请que认温育wei置既不tou光也不toufeng(如抽ti内)。

b.原因:操zuo时间拖太久。

解决办fa:请在方fashu练后再进行操zuo。

c.原因:微孔间相互污ran。

解决办fa: 加样品时,请小心wu溅出微孔外,以免造成qi它微孔的污ran。

d.原因:biao准品或酶biao记物所加入的量不一謑ong

解决办fa:请使用已xiao正过的移液枪,并que保qi与吸头之间you高度密合衴u

e.原因:tian加样品或shiji的操zuo方fa不正que。

解决办fa:加样品或shiji时,吸头请wu接chu微孔。

f.原因:洗板过程发生问题(如管耭an聅ai、洗完板后wei立刻进行xia一步骤)。

解决办fa:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行xia一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。

a.原因:室温太高(>25℃)。

解决办fa: 若无fa降低室内温度,请shi当缩短步骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到污ran。

解决办fa: 若发现底物溶液已cheng现淡蓝色,请不要再使用。

c.原因:反ying时间超过太久。

解决办fa:请控制反ying时间。

d.原因:酶biao记物污ran了盒内qi它shiji。

解决办fa:使用过的吸头ying立即丢弃,可bi免shiji间相互污ran,凡是shiji(te别是酶biao记物与底物溶液)接chu过的容器ying立即清洗干净。(先以漂白水jin泡,再以清水chong洗干净,可que保无残留)

4. 阴性biao准品的吸光值低yuyang性biao准品的吸光值。

a.原因:微孔中的shijiwei能充分混合。

解决办fa: shiji加完后,xu轻敲pan四周使qi充分混合均匀。

b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。

解决办fa:请参考2-f.

c.原因:tian加样品或酶biao记物的量不一謑ong

解决办fa: 请参考2-d.

注意事xiang:

A 仔细阅读shuomingshu。

B 检查shiji盒biao签shang的you效期。如果超过you效期,请wu使用。

C 按shuomingshuqueding所youshijiqi全(数量、体ji)。

D biao本制备要规fan,每份biao本体ji要按2-3gefu孔以shang的量制备(贮存),尽量穤hong皕uo备份。短期内无fa实yan者,注意低温保存。

E 准备好所you实yan额外所xu物品,(比如移液器,shi管,清洗器,酶biao仪)。

F 按shuomingshu将所用shiji平衡至室温,根ju检测biao本数量queding所xushiji的量。

G 检查shiji盒内每种shiji的贮存条件,保证所youshiji均按照shiji盒内shuomingshutui荐的条件存储。

H 检查不稳ding或者bian质的shiji溶液(比如沉淀或bian色)。you些shiji,比如biao准品稀释液或者检测稀释液,可能在she计时就含you沉淀物。所youshiji在di入酶biao板之前,必xu充分混匀。而由yu沉淀物的te性,在加入酶biao板之前,必xu不ting搅拌。

I 保证充分的fu育时间和温度。

J 切wu使用不同生chan批号的shiji取代现youshiji或混合现youshiji。

K 在混合或溶解蛋白溶液时,bi免泡沫chan生。

L 在实yan开始之前,安排好实yan流程。

M 在实yan开始之前,清jie工zuo台。

N 若you问题,ying与我公司或代理商的技术zhi持联系

大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联**吸附检测shiji盒jie果舩ie吸/b>:

1. 每gebiao准品的OD值减去空白孔的OD值后zuo图,如she置fu孔,zeying取qi平均值计算。以biao准品的浓度为横zuobiao,OD謉i輟uobiao,绘出biao准qu线。亦可以OD謉i醶uobiao,biao准品的浓度为纵zuobiao,绘出biao准qu线。

2. tui荐使用专ye的qu线制zuo软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界面既可根ju样品OD值,由biao准qu线查出相ying的浓度,cheng以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入biao准qu线的拟合方程式,计算出样品浓度,再cheng以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高yubiao准qu线shang限,yingshi当稀释后重测,计算浓度时yingcheng以稀释倍数。

 teyi性:

本shiji盒用yu检测大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1),经检测与qi它相似物质无ming显交叉反ying。

由yu受到技术及样本laiyuan的限制,不可能完成对所you相关或相似物质交叉反ying检测,因此本shiji盒you可能与wei经检测的qi它物质you交叉反ying。

回收率:

分别yuding值血清及血jiang样本中加入一ding量的大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)(加biao样品),重fu测ding并计算qi均值,回收率为测ding值与理论值的比率

线性:

在ding值血清及血jiang样本内加入shi量的大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1),并倍比稀释成 1:21:41:81:16 的待测样本,线性fan围即为稀释后样本中大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)含量的测ding值与理论值的比率。


大鼠钙调lin酸酶jie合蛋白1(CABIN1)酶联**吸附检测shiji盒jing密度:

jing密度用样品测ding值的bianyi系数 CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

批内差:取同批次shiji簒ie缘汀⒅小⒏咧礵ing值样本进行ding量检测,每份样本连续测ding 20 次,分别计算不同浓度样本的平均值及 SD 值。

批间差:选取 3 ge不同批次的shiji盒分别对低、中、高值ding值样本进行ding量测ding,每ge样本使用同一shiji盒重fu

测ding 8 次,分别计算不同浓度样本的平均值及 SD 值。

批内差: CV<10%

批间差: CV<12%

稳ding性:

经测ding,shiji盒在you效期内按tui荐温度保存,qi活性降低聅hiu 5%

为减小外部因素对shiji盒破坏前后检测值的影响,实yan蕐e幕肪程跫u尽量保持一zhi,尤qi是实yan室内温度、湿度及温育条件。qi次由同一实yan员lai进行操zuo可减少人为误差。


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