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大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lianmian疫吸附检测蕐ue羑e

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荣一deng录名chen: 大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lianmian疫吸附检测蕐ue羑e
荣一deng录型hao: CAMK2
荣一deng录展商: ELISA蕐ue羑e
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大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lianmian疫吸附检测蕐ue羑e  的详细介绍

大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lian**吸附检测蕐ue羑e

使用说ming书

预qiying用

本蕐ue梁xing擞盟僖籨eng录夹心ELISA法dingliang测ding大鼠血清、血浆、组zhi匀浆、细bao裂解液、细bao培养上清液簍ui鋞asheng物液体中gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)含liang。

大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lian**吸附检测蕐ue羑e基本原理:

本蕐ue羑e采用双荣一deng录夹心ELISA法。觤ei勾笫骻ai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)荣一deng录baobei于酶标板上,实验时样品或标准品中的大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)与baobei荣一deng录结合,游离的成穤hi幌磓u。yi次加入sheng物素化的kang大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)荣一deng录和lagen过氧化物酶标记的qin和素。kang大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)荣一deng录与结合在baobei荣一deng录上的大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)结合、sheng物素与qin和素te异xing结合而形成**复合物,游离的成穤hi幌磓u。加入显se底物(TMB),TMB在lagen过氧化物酶的催化下呈现蓝se,加终止液后bian成huangse。用酶标yi在450nm波长处测OD值,大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)nong度与OD450值之间呈正比,tong过绘制标准曲线计算出样品中大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)的nong度。

描述:

英wen名chen Rat CAMK2 (Calcium/Calmodulin-Dependent Protein Kinase-Ⅱ) ELISA Kit
中wen名chen 大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lian**吸附测ding蕐ue羑e
货hao X-EL-R0138c 种属 Rat/大鼠
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双荣一deng录夹心法
检测范围 15.625~1000pg/mL 灵敏度 9.375pg/mL

成:

中wen名chen

英wen名chen

gui格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩sheng物素化荣一deng录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化荣一deng录稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩洗di襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

荣一deng录说ming书

Product  Description

  1 fen

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

te别说ming
*: [96T/48T](打kaibao装后请及时检查所有物品是否齐全完整)
#: 
一zhouna使觤ei纱嬗冱/span>4℃,需长时间存放或多磜en褂胘ianyi存于-20.                                      

大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lian**吸附检测蕐ue羑e检测前准备工作:

1. 请ti前20分zhong从bing箱中取出蕐ue羑e,平hengzhi室温。

2. 将nong缩洗di液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放hui4℃。从bing箱中取出的nong缩洗di液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再pei制洗di襤ai尤任露萣uyao超过50℃,使用时洗di液ying为室温)。当日使用。

3. 标准品: 于10000×g离心1分zhong,加入标准品&样品稀释液1.0mLzhi冻干标准品中,xuan紧guan盖,静置10分zhong,上下颠倒数次,待qi充分溶解后,用移液器将qiqingqinghun匀(nong度为1000pg/mL)。然后gen据需yao进行倍比稀蕋ingㄗⅲ篵uyaozhi接在反ying孔中进行倍比稀蕋ingianyipei制成以下nong度:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液zhi接作为kong白孔0ng/mL。如pei制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EPguan中,hun匀即可,qi余nong度yi此类tui。 

4. sheng物素化荣一deng录工作襤ai菏笛榍凹扑愕贝wen笛樗栌胠iang(以100μL/孔计),实际pei制时ying多pei制100-200μL。使用前15分zhong,以sheng物素化荣一deng录稀释液稀释nong缩sheng物素化荣一deng录(1:100)成工作nong度。当日使用。

5. 酶结合物工作襤ai菏笛榍凹扑愕贝wen笛樗栌胠iang(以100μL/孔计),实际pei制时ying多pei制100-200μL。使用前15分zhong,以酶结合物稀释液稀释nong缩HRP酶结合物(1:100)成工作nong度。

当日使用。

大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lian**吸附检测蕐ue羑e标准品稀释方法图例aiㄒ?00μL/guan为例,ye可gen据实际用lianglai稀蕋ing?00μL/guan)

1.使用前将所有的蕐ue梁捅瓯净郝齤unhengzhi室温(18-25oC),蕐ue羈u能zhi接在37oC溶解。

2.标准品(冻干品):mei瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大yue10分zhong,同时反复颠倒/搓动以助溶解,qinong度为1000pg/mL。准备7个稀释标准品的EPguan,mei个EPguan中加入500μL的标准品稀释襤ai缤妓緔i次倍比稀蕋ing曜计废∈鸵裹span>(0pg/mL)zhi接作为kong白孔。为保证实验结果有效xing,mei磜en笛榍胧褂眯碌谋曜计啡芤骸

      

1. 在ge孔中加入标准品或样品ge100μL, 37℃孵育90分zhong

2. 加入100μL sheng物素化荣一deng录工作襤ai?7℃孵育60分zhong

3. 洗di3次

4. 加入100μL酶结合物工作襤ai?nbsp;37℃孵育30分zhong

5. 洗di5次

6. 加入90μL底物溶襤ai?nbsp;37℃孵育15分zhong左右

7. 加入50μL终止襤ai⒓丛?50nm波长处测liangOD值

8. 结果计算

一、操作因素对ELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作bu当将引起jiao大的误cha。以下叙述ge个步骤中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗di

4.显se

5.比se

er、粂i纳柚胻ong常情况下,ELISAdingxing实验以“阳xing”和“yinxing”lai报告结果,两者间有一条分界线beichen为“阳xingpan断值”(cut-off value,CO值),这是dingxing**测ding结果报告的yi据。

三、标本复查ELISA手工检测过程复杂,影响因素jiao多,即使室na质控在控,ye可能因孔间cha异而造成结果的cha异,因此加大复查力度是保证结果准确xing的可靠方法,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳xing标本及少jian模蔶iang募觳饨峁懈床椤

四、结果pan断和报告常用下lieji种方法表示结果:

1.dingxing测ding

2.半dingliang测ding 结果一般以滴度表示。

3.dingliang测ding 即用已知liang的标准品作一系lie稀释后进行ELISA测ding,绘制标准曲线,结果以优良liang或单位表示。在ELISAdingliang检测中mei一块反ying板都必须绘制相ying的标准曲线。

大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lian**吸附检测蕐ue羑e会出现的wen题及解决办法:

1. 加入反ying终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.原因:蕐ue羑enarong物未能充分hui。

解决办法:确ding蕐ue羑enarong物hui温后再进行操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,适当延长温育时间。

d.原因:未使用蕐ue羑e的清洗液清洗。

解决办法: 请用蕐ue羑ena所ti供的清洗液清洗。

e.原因:蕐ue羑e已过有效qi限。

解决办法:请更换成仍在有效qi限na的蕐ue羑e。

2. 标准曲线线xingbu佳,或是平行xingbu好。

a.原因:温育位置bi光bu好或shou到qi流干rao。

解决办法: 请确认温育位置既butou光yebutoufeng(如抽屉na)。

b.原因:操作时间拖太久。

解决办法:请在方法熟lian后再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样品时,请小心勿jian出微孔wai,以mian造成qi它微孔的污染。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的liangbu一致。

解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保qi与吸头之间有gao度密合xing。

e.原因:添加样品或蕐ue恋牟僮鞣椒╞u正确。

解决办法:加样品或蕐ue潦保非胛鸾哟ノ⒖住

f.原因:洗板过程发shengwen题(如guan路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。

解决办法:请随时监控洗板ji洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。

3. 吸光值jun偏gao(或线xingbu筯uan?。

a.原因:室温太gao(>25℃)。

解决办法: 若wu法jiang低室na温度,请适当缩短步骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液shou到污染。

解决办法: 若发现底物溶液已呈现dan蓝se,请buyao再使用。

c.原因:反ying时间超过太久。

解决办法:请控制反ying时间。

d.原因:酶标记物污染了henaqi它蕐ue痢

解决办法:使用过的吸头ying立即ding弃,可bimian蕐ue良湎嗷ノ廴荆彩鞘yue?te别是酶标记物与底物溶液)接触过的rong器ying立即清洗干净。(先以漂白水浸pao,再以清水冲洗干净,可确保wu残留)

4. yinxing标准品的吸光值低于阳xing标准品的吸光值。

a.原因:微孔中的蕐ue廖茨艹浞謍un合。

解决办法: 蕐ue良油旰螅鑡ing敲盘四zhou使qi充分hun合jun匀。

b.原因:洗板过程发shengwen题(同2-f.)。

解决办法:请can考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的liangbu一致。

解决办法: 请can考2-d.

注意事项:

A zi细阅读说ming书。

B 检查蕐ue羑e标签上的有效qi。如果超过有效qi,请勿使用。

C 按说ming书确ding所有蕐ue疗肴ㄊ齦iang、体积)。

D 标本制备yaogui范,meifen标本体积yao按2-3个复孔以上的liang制备(贮存),尽liang穤hong白霰竑en。短qinawu法实验者,注意低温保存。

E 准备好所有实验额wai所需物品,(比如移液器,试guan,清洗器,酶标yi)。

F 按说ming书将所用蕐ue疗絟engzhi室温,gen据检测标本数liang确ding所需蕐ue恋膌iang。

G 检查蕐ue羑enamei种蕐ue恋闹嫣跫Vに惺yue羓un按照蕐ue羑ena说ming书tui荐的条件存chu。

H 检查bu稳ding或者bian质的蕐ue寥芤haiū热绯恋砘騜ianse)。有些蕐ueli热绫曜计废∈鸵夯蛘呒觳庀∈鸵hai赡茉谏杓剖本秃谐恋砦铩K惺yue猎诘稳朊副臧逯埃匦璩浞謍un匀。而由于沉淀物的texing,在加入酶标板之前,必需buting搅ban。

I 保证充分的孵育时间和温度。

J 切勿使用bu同sheng产批hao的蕐ue寥〈zhong惺yue粱騢un合蟴hong惺yue痢

K 在hun合或溶解蛋白溶液时,bimianpao沫产sheng。

L 在实验kai始之前,安pai好实验流程。

M 在实验kai始之前,清洁工作台。

N 若有wen题,ying与我gong司或代理商的技术支硓hi

大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lian**吸附检测蕐ue羑e结果pan断:

1. mei个标准品的OD值jianqukong白孔的OD值后作图,如设置复孔,则ying取qi平jun值计算。襶uan曜计返膎ong度为横坐标,OD值为zong坐标,绘出标准曲线。yi可以OD值为横坐标,标准品的nong度为zong坐标,绘出标准曲线。

2. tui荐使用专ye的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界面既可gen据样品OD值,由标准曲线查出相ying的nong度,cheng以稀释倍数;yi可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计算出样品nong度,再cheng以稀释倍数,即为样品的实际nong度。

3. 若样品OD值gao于标准曲线上限,ying适当稀释后zhong测,计算nong度时yingcheng以稀释倍数。

 te异xing:

本蕐ue羑e用于检测大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2),经检测与qi它相似物质wuming显交叉反ying。

由于shou到技术及样本lai源的限制,bu可能完成对所有相关或相似物质交叉反ying检测,因此本蕐ue羑e有可能与未经检测的qi它物质有交叉反ying。

hui收率:

穤hi鹩赿ing值血清及血浆样本中加入襤uan╨iang的大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)(加标样品),zhong复测ding并计算qijun值,hui收率为测ding謉i肜砺壑档谋嚷

线xing:

在ding值血清及血浆样本na加入适liang的大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2),并倍比稀释成 1:21:41:81:16 的待测样本,线xing范围即为稀释后样本中大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)含liang的测ding謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻspan>


大鼠gai/gai调素yi赖xing蛋白ji酶2(CAMK2)酶lian**吸附检测蕐ue羑e精密度:

精密度用样品测ding值的bian异系数 CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

批nacha:取同批磜enyue羑e对低、中、gao值ding值样本进行dingliang检测,meifen样本连续测ding 20 次,穤hi鸺扑鉨u同nong度样本的平jun值及 SD 值。

批间cha:选取 3 个bu同批次的蕐ue羑e穤hi鸲缘汀⒅小ao值ding值样本进行dingliang测ding,mei个样本使用同一蕐ue羑ezhong复

测ding 8 次,穤hi鸺扑鉨u同nong度样本的平jun值及 SD 值。

批nacha: CV<10%

批间cha: CV<12%

稳dingxing:

经测ding,蕐ue梁xing谟行ina按tui荐温度保存,qihuoxingjiang低率小于 5%

为jian小wai部因素对蕐ue羑e破籨eng昂蠹觳庵档挠跋欤笛槭ye幕肪程跫杈iang保持一致,尤qi是实验室na温度、湿度及温育条件。qi次由同一实验yuanlai进行操作可jian少人为误cha。


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