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大鼠钙调su(CAM)酶lian免疫吸附jiance试剂盒

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荣yidenglu名chen: 大鼠钙调su(CAM)酶lian免疫吸附jiance试剂盒
荣yidenglu型号: CAM
荣yidenglu展商: ELISA试剂盒
荣yidenglu文dang: 无相guan文dang

jian单jie绍

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大鼠钙调su(CAM)酶lian免疫吸附jiance试剂盒  de详细jie绍

大鼠钙调su(CAM)酶lian**吸附jiance试剂盒

使用说明书

yuqi应用

ben试剂盒运用双荣yidenglu夹心ELISA法定量ce定大鼠血清、血浆、组织yun浆、细胞裂解液、细胞pei养上清液和其他生物液ti中钙调su(CAM)含量。

大鼠钙调su(CAM)酶lian**吸附jiance试剂盒基benyuanli:

ben试剂盒采用双荣yidenglu夹心ELISA法。用抗大鼠钙调su(CAM)荣yidenglu包被yu酶标板上,shiyan时yangpin或标zhunpin中de大鼠钙调su(CAM)yu包被荣yidenglu结合,游lide成分被洗qu。依次加入生物su化de抗大鼠钙调su(CAM)荣yidenglu和辣根过氧化物酶标记deqin和su。抗大鼠钙调su(CAM)荣yidengluyu结合在包被荣yidenglu上de大鼠钙调su(CAM)结合、生物suyuqin和su特异性结合而形成**fu合物,游lide成分被洗qu。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶decui化xiachengxianlan色,加终止液后bian成黄色。用酶标仪在450nm波长chuceOD值,大鼠钙调su(CAM)浓度yuOD450值之间cheng正比,通过绘制标zhun曲xian计算chuyangpin中大鼠钙调su(CAM)de浓度。

描shu:

英文名chen Rat CAM (Calmodulin) ELISA Kit
中文名chen 大鼠钙调su(CAM)酶lian**吸附ce定试剂盒
货号 X-EL-R0140c zhong属 Rat/大鼠
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jiance方法 双荣yidenglu夹心法
jiance范wei 0.156~10ng/mL ling敏度 0.094ng/mL

组成:

中文名chen

英文名chen

规格

保存

  ELISA酶标板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标zhunpin

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标zhunpin&yangpin稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物su化荣yidenglu

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物su化荣yidenglu稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣yidenglu说明书

Product  Description

  1 

 

謘hi毂ǜ妩/span>

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时jian查所有物pin是否齐全完整)
#: 
yi周内使用可存yu4℃,需长时间存放或duo次使用建yi存yu-20.                                      

大鼠钙调su(CAM)酶lian**吸附jiance试剂盒jiance前zhun备gong作:

1. 请提前20穤hong哟颖渲腥hu试剂盒,平衡至室蝜ong

2. 将浓缩洗涤液用双zheng水稀释(1:25)。wei用完de放回4℃。从冰箱中取chude浓缩洗涤液可neng有结晶,属yu正常xianxiang,可用40℃水yu微加热使结晶完全溶解后zai配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。

3. 标zhunpin: yu10000×gli心1穤hong樱尤氡陑hunpin&yangpin稀释液1.0mL至冻干标zhunpin中,旋紧guangai,静置10穤hong樱蟲ia颠倒数次,待其chong分溶解后,用移液器将其轻轻混yun(浓度为10ng/mL)。萮uan蟾鵭u需要进行倍比稀释(注:不要直jie在反应孔中进行倍比稀释)。建yi配制成以xia浓度:按照稀蕋ou椒ㄍ祭?nbsp;标zhunpin&yangpin稀释液直jie作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标zhunpin:取0.5mL10ng/mLde上shu标zhunpin加入含有0.5mL标zhunpin&yangpin稀释液deEPguan中,混yun即可,其余浓度依此类推。 

4. 生物su化荣yidenglugong作液:shiyan前计算当次shiyan所需用量(以100μL/縵hun疲瑂hi际配制时应duo配制100-200μL。使用前15穤hong樱陨飐u化荣yidenglu稀释液稀释浓缩生物su化荣yidenglu(1:100)成gong作浓度。当日使用。

5. 酶结合物gong作液:shiyan前计算当次shiyan所需用量(以100μL/縵hun疲瑂hi际配制时应duo配制100-200μL。使用前15穤hong樱悦附岷衔锵∈鸵合∈团ㄋ鮄RP酶结合物(1:100)成gong作浓度。

当日使用。

大鼠钙调su(CAM)酶lian**吸附jiance试剂盒标zhunpin稀蕋ou椒ㄍ祭海ㄒ?00μL/guan为例,也可根jushi际用量来稀释,如200μL/guan)

1.使用前将所有de试剂和标benhuan慢均衡至室温(18-25oC),试剂不neng直jie在37oC溶解。

2.标zhunpin(冻干pin):每瓶标zhunpin加入标zhunpin稀释液1mL,gai好后室温静置大约10穤hong樱瑃ong时反fu颠倒/搓dong以助溶解,其浓度为10ng/mL。zhun备7个稀释标zhunpindeEPguan,每个EPguan中加入500μLde标zhunpin稀释液,如图所示依次倍比稀释,标zhunpin稀释液(0pg/mL)直jie作为空白孔。为保证shiyan结果有效性,每次shiyan请使用新de标zhunpin溶液。

      

1. 在各孔中加入标zhunpin或yangpin各100μL, 37℃孵yu90穤hong

2. 加入100μL 生物su化荣yidenglugong作液,37℃孵yu60穤hong

3. 洗涤3次

4. 加入100μL酶结合物gong作液, 37℃孵yu30穤hong

5. 洗涤5次

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵yu15穤hong幼笥

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长chuce量OD值

8. 结果计算

yi、操作因su对ELISA结果de影xiangELISA操作步骤fu杂,操作不当将yin起较大dewu差。以xia叙shu各个步骤中de影xiang因su。

1.加yang

2.温yu

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰区de设置通常情kuangxia,ELISA定性shiyan襶u皔ang衴u焙汀耙跣yu崩幢ǜ娼峁秸呒溆衴i条分界xian被chen为“yang性pan秞ian怠保╟ut-off value,CO值),这是定性**ce定结果报告de依ju。

三、标benfu查ELISA手gongjiance过程fu杂,影xiang因su较duo,即使室内质控在控,也可neng因縵hun洳钜於斐山峁鹍e差异,因此加大fu查力度是保证结果zhun确性de可靠方法,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目de可疑、弱yang衴uan阞en及shao见模shidejiance结果进行fu查。

四、结果pan断和报告常用xia列jizhong方法表示结果:

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果yiban以滴度表蔶in

3.定量ce定 即用yi知量de标zhunpin作yi系列稀释后进行ELISAce定,绘制标zhun曲xian,结果以优良量或单位表蔶inT贓LISA定量jiance中每yi块反应板du必须绘制相应de标zhun曲xian。

大鼠钙调su(CAM)酶lian**吸附jiance试剂盒会chuxiande问题及解决办法:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值pian低。

a.yuan因:wei加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.yuan因:试剂盒内容物weinengchong分回。

解决办法:确定试剂盒内容物回温后zai进行操作。

c.yuan因:室温太低。

解决办法:ruo室温太低(<19℃),请yu操作步骤4,蕇hi毖映の聐u时间。

d.yuan因:wei使用试剂盒de清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所提供de清洗液清洗。

e.yuan因:试剂盒yi过有效qixian。

解决办法:请更换成仍在有效qixian内de试剂盒。

2. 标zhun曲xianxian性不佳,或是平行性瞙uan谩

a.yuan因:温yu位置避光瞙uan没蚴艿狡鞲蓃ao。

解决办法: 请确认温yu位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.yuan因:操作时间拖太jiu。

解决办法:请在方法熟练后zai进行操作。

c.yuan因:微縵hun湎嗷ノ廴jin

解决办法: 加yangpin时,请小心勿溅chu微孔外,以免造成其它微孔de污萰in

d.yuan因:标zhunpin或酶标记物所加入de量不yi謑ong

解决办法:请使用yi校正过de移液枪,并确保其yu吸tou之间有高度密合衴u

e.yuan因:添加yangpin或试剂de操作方法不正确。

解决办法:加yangpin或试剂时,吸tou请勿jie触微孔。

f.yuan因:洗板过程发生问题(如guan路堵sai、洗完板后wei立刻进行xiayi步骤)。

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完后立即进行xiayi步骤。

3. 吸光值均pian高(或xian性不筯uan?。

a.yuan因:室温太高(>25℃)。

解决办法: ruo无法絛ang褪夷谖露龋胧shi彼醵滩街?de温yu时间。

b.yuan因:底物溶液受到污萰in

解决办法: ruo发xian底物溶液yichengxian淡lan色,请不要zai使用。

c.yuan因:反应时间超过太jiu。

解决办法:请控謕in从κ奔洹

d.yuan因:酶标记物污染了盒内其它试剂。

解决办法:使用过de吸tou应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物yu底物溶液)jie触过de容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,zai以清水chong洗干净,可确保无残留)

4. 阴衴uan陑hunpinde吸光謉ang蛓uyang衴uan陑hunpinde吸光值。

a.yuan因:微孔中de试剂weinengchong分混合。

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其chong分混合均yun。

b.yuan因:洗板过程发生问题(tong2-f.)。

解决办法:请参考2-f.

c.yuan因:添加yangpin或酶标记物de量不yi謑ong

解决办法: 请参考2-d.

注意事项:

A zi细yuedu说明书。

B jian查试剂盒标签上de有效qi。如果超过有效qi,请勿使用。

C 按说明书确定所有试剂齐全(数量、ti积)。

D 标ben制备要规范,每份标benti积要按2-3个fu孔以上de量制备(贮存),jin量分装做备份。短qi内无法shiyan者,注意低温保存。

E zhun备好所有shiyane外所需物pin,(比如移液器,试guan,清洗器,酶标仪)。

F 按说明书将所用试剂平衡至室温,根jujiance标ben数量确定所需试剂de量。

G jian查试剂盒内每zhong试剂de贮存条件,保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推jiande条件存储。

H jian查不稳定或者bian质de试剂溶液(比如沉淀或bian色)。有些试糽i热绫陑hunpin稀释液或者jiance稀释液,可neng在设计蔮en秃谐恋砦铩K惺约猎诘稳朊副臧逯埃匦鑓hong分混yun。而由yu沉淀物de特性,在加入酶标板之前,必需不停搅拌。

I 保证chong分de孵yu时间和温度。

J 切勿使用不tong生产批号de试剂取代xian有试剂或混合xian有试剂。

K 在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产生。

L 在shiyan开shi之前,an排好shiyan流程。

M 在shiyan开shi之前,清洁gong作台。

N ruo有问题,应yu我公si或代li商de技shu支持lian系

大鼠钙调su(CAM)酶lian**吸附jiance试剂盒结果pan断:

1. 每个标zhunpindeOD值减qu空白孔deOD值后作图,如设置fu孔,则应取其平均值计算。襶uan陑hunpinde浓度为横zuo标,OD值为纵zuo标,绘chu标zhun曲xian。亦可以OD值为横zuo标,标zhunpinde浓度为纵zuo标,绘chu标zhun曲xian。

2. 推jian使用专业de曲xian制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界mian既可根juyangpinOD值,由标zhun曲xian查chu相应de浓度,乘以稀释倍数;亦可将yangpindeOD值代入标zhun曲xiande拟合方程shi,计算chuyangpin浓度,zai乘以稀释倍数,即为yangpindeshi际浓度。

3. ruoyangpinOD值高yu标zhun曲xian上xian,应蕇hi毕∈秃笾豤e,计算浓度时应乘以稀释倍数。

 特异性:

ben试剂盒用yujiance大鼠钙调su(CAM),jingjianceyu其它相似物质无明显交叉反应。

由yu受到技shu及yangben来yuandexian制,不可neng完成对所有相guan或相似物謘hi徊娣从iance,因此ben试剂盒有可nengyuweijingjiancede其它物质有交叉反应。

回收率:

分别yu定值血清及血浆yangben中加入yi定量de大鼠钙调su(CAM)(加标yangpin),重fuce定并计算其均值,回收率为ce定值yuli论值de比率

xian性:

在定值血清及血浆yangben内加入适量de大鼠钙调su(CAM),并倍比稀释成 1:21:41:81:16 de待ceyangben,xian性范wei即为稀释后yangben中大鼠钙调su(CAM)含量dece定值yuli论值de比率。


大鼠钙调su(CAM)酶lian**吸附jiance试剂盒jing密度:

jing密度用yangpince定值debian异系数 CV 表蔶inⅫ/span>CV(%) = SD/mean×100

批内差:取tong批次试剂盒对低、中、高值定值yangben进行定量jiance,每份yangben连续ce定 20 次,分别计算不tong浓度yangbende平均值及 SD 值。

批间差:选取 3 个不tong批次de试剂盒分别对低、中、高值定值yangben进行定量ce定,每个yangben使用tongyi试剂盒重fu

ce定 8 次,分别计算不tong浓度yangbende平均值及 SD 值。

批内差: CV<10%

批间差: CV<12%

稳定性:

jingce定,试剂盒在有效qi内按推jian温度保存,其活性絛ang吐市u 5%

为减小外部因su对试剂盒po籨eng昂骿iance值de影xiang,shiyan室de环jing条件需jin量保持yi致,尤其是shiyan室内温度、shi度及温yu条件。其次由tongyishiyanyuan来进行操作可减shao人为wu差。


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