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da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联免yi吸附检测试ji盒

如果您dui该荣一登耲i衳ing趣的话,可yi
荣一登录名chen: da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联免yi吸附检测试ji盒
荣一登录型号: CALU
荣一登录展商: ELISA试ji盒
荣一登录文档: 无xiang关文档

简dan介shao

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da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联免yi吸附检测试ji盒  的详xi介shao

da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**吸附检测试ji盒

使用shuo明书

yuqi应用

本试ji盒运用shuang荣一登录夹心ELISA法定量测定da鼠血清、血浆、组织yun浆、xi胞裂jie液、xi胞培养上清液和其他生物液体中钙腔蛋白(CALU)含量。

da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**吸附检测试ji盒基本原li:

本试ji盒采用shuang荣一登录夹心ELISA法。用抗da鼠钙腔蛋白(CALU)荣一登耲i黚ei于酶标板上,实验时样品或标准品中的da鼠钙腔蛋白(CALU)与包bei荣一登录结合,游离的成穤hi粁i去。襩ai渭尤肷锼豩ua祄u筪a鼠钙腔蛋白(CALU)荣一登录和la根过氧hua物酶标记的亲和素。抗da鼠钙腔蛋白(CALU)荣一登录与结合zai包bei荣一登录上的da鼠钙腔蛋白(CALU)结合、生物素与亲和素特异性结合而xing成**复合物,游离的成穤hi粁i去。加入显色底物(TMB),TMBzaila根过氧hua物酶的催hua下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪zai450nm波长处测OD值,da鼠钙腔蛋白(CALU)浓du与OD450值之间呈正bi,通过绘制标准曲线计算出样品中da鼠钙腔蛋白(CALU)的浓du。

描述:


基本原li 描述 试ji盒组成 操zuo步骤 geng多资料
英文名chen Rat CALU (Calumenin) ELISA Kit
謝ing拿鹀hen da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**吸附测定试ji盒
货号 X-EL-R0144c 种属 Rat/da鼠
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuang荣一登录夹心法
检测范围 0.78100000000000003~50ng/mL 灵敏du 0.46899999999999997ng/mL

组成:

謝ing拿鹀hen

英文名chen

规ge

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素hua荣一登录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素hua荣一登录稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

fan应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fu膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣一登录shuo明书

Product  Description

  1 fen

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别shuo明
*: [96T/48T](打开包装后qingji时检cha所觴ing锲肥莊u齐全wan整)
#: 
一周内使用可存于4℃,需长时间存放或多次使用建yi存于-20.                                      

da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**吸附检测试ji盒检测前准备工zuo:

1. qingti前20分钟从bing箱中取出试ji盒,平衡zhishi温。

2. jiang浓缩xi祔ou河胹huangzheng水稀释(1:25)。未用wan的放hui4℃。从bing箱中取出的浓缩xi祔ou嚎赡苡薪峋В粲谡O謝iang,可用40℃水浴微加热使结晶wan全溶jie后再pei制xi祔ou海尤任耫u不要超过50℃,使用时xi祔ou河ξ猻hi温)。礲i帐褂谩

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mLzhi冻干标准品中,旋jin管gai,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶jie后,用yi液器jiang其轻轻hunyun(浓du为50ng/mL)。然后根ju需要jin行倍眗en∈停▃hu:不要zhi接zaifan应孔中jin行倍眗en∈停=▂ipei制成yi下浓du:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液zhi接zuo为空白孔0ng/mL。如pei制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中,hunyun即可,其余浓du襩ai死嗤啤?nbsp;

4. 生物素hua荣一登录工zuo液:实验前计算当次实验所需用量(yi100μL/孔计),实际pei制时应多pei制100-200μL。使用前15分钟,yi生物素hua荣一登录稀释液稀释浓缩生物素hua荣一登录(1:100)成工zuo浓du。礲i帐褂谩

5. 酶结合物工zuo液:实验前计算当次实验所需用量(yi100μL/孔计),实际pei制时应多pei制100-200μL。使用前15分钟,yi酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工zuo浓du。

礲i帐褂谩Ⅻspan>

da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**吸附检测试ji盒标准品稀释方法图例:(yi500μL/管为例,也可根ju实际用量lai稀释,如200μL/管)

1.使用前jiang所有的试ji和标本缓慢均衡zhishi温(18-25oC),试ji不能zhi接zai37oC溶jie。

2.标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,gai好后shi温静置da约10分钟,同时fan复颠倒/搓动yi助溶jie,其浓du为

50ng/mL
。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入500μL的标准品稀释液,如图所示襩ai伪侗ren∈停曜计废∈鸵裹span>(0pg/mL)zhi接zuo为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验qing使用新的标准品溶液。

      

1. zai各孔中加入标准品或样品各100μL, 37℃孵育90分钟

2. 加入100μL 生物素hua荣一登录工zuo液,37℃孵育60分钟

3. xi涤3次

4. 加入100μL酶结合物工zuo液, 37℃孵育30分钟

5. xi涤5次

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左you

7. 加入50μL终止液,立即zai450nm波长处测量OD值

8. 结果计算

一、操zuo因素duiELISA结果的影响ELISA操zuo步骤复杂,操zuo不当jiang引qi絰i蟮奈蟛睢i下叙述各个步骤中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.xi涤

4.显色

5.bi色

二、灰qu的she置通常情况下,ELISA定性实验yi“阳性”和“阴性”lai报告结果,两zhe间有一条分界线beichen为“阳性判duan值”(cut-off value,CO值),这是定性**测定结果报告的依ju。

三、标本复chaELISAshou工检测过cheng复杂,影响因素较多,即使shi内质控zai控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加da复cha力du是保证结果准que性祄u煽糠椒ǎ琤i如duiHBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab祌en頼u祄u梢伞uo阳性标本jishao见模式的检测结果jin行复cha。

四、结果判duan和报告常用下lieji謟hi椒ū硎窘峁

1.定性测定

2.ban定量测定 结果一般yi滴du表蔶in

3.定量测定 即用yi知量的标准品zuo一系lie稀释后jin行ELISA测定,绘制标准曲线,结果yiyou羓i炕騞an位表蔶inaiELISA定量检测中每一块fan应板都必须绘制xiang应的标准曲线。

da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**吸附检测试ji盒hui出现的问tijijie决办法:

1. 加入fan应终止液后,没觴ing庵祷蛭庵灯汀

a.原因:未加入酶标记物。

jie决办法:qing按照操zuo步骤jin行。

b.原因:试ji盒内rong物未能充分hui。

jie决办法:que定试ji盒内rong物hui温后再jin行操zuo。

c.原因:shi温太低。

jie决办法:若shi温太低(<19℃),qing于操zuo步骤4,shi当延长温育时间。

d.原因:未使用试ji盒的清xi液清xi。

jie决办法: qing用试ji盒内所ti供的清xi液清xi。

e.原因:试ji盒yi过有效qi限。

jie决办法:qinggeng换成仍zai有效qi限内的试ji盒。

2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育位置避光不好或受到qi流干扰。

jie决办法: qingqueren温育位置既不透光也不透feng(如抽屉内)。

b.原因:操zuo时间拖太久。

jie决办法:qingzai方法熟练后再jin行操zuo。

c.原因:微孔间xiang互wu萰in

jie决办法: 加样品时,qing小心勿溅出微孔外,yi免造成其它微孔的wu萰in

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不一致。

jie决办法:qing使用yi校正过的yi液枪,并que保其与吸头之间有高du密合性。

e.原因:添加样品或试ji的操zuo方法不正que。

jie决办法:加样品或试ji时,吸头qing勿接触微孔。

f.原因:xi板过chengfa生问ti(如管ludusai、xiwan板后未立刻jin行下一步骤)。

jie决办法:qing随时监控xi板机xi板过cheng,xiwan后立即jin行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。

a.原因:shi温太高(>25℃)。

jie决办法: 若无法降低shi内温du,qingshi当缩短步骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到wu萰in

jie决办法: 若fa现底物溶液yi呈现dan蓝色,qing不要再使用。

c.原因:fan应时间超过太久。

jie决办法:qing控制fan应时间。

d.原因:酶标记物wu染了盒内其它试ji。

jie决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试ji间xiang互wu染,凡是试ji(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的rong器应立即清xi干净。(先yi漂白水浸pao,再yi清水chongxi干净,可que保无残留)

4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原因:微孔中的试ji未能充分hun合。

jie决办法: 试ji加wan后,需轻敲盘四周使其充分hun合均yun。

b.原因:xi板过chengfa生问ti(同2-f.)。

jie决办法:qing参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。

jie决办法: qing参考2-d.

zhu意shixiang:

A 仔xi阅读shuo明书。

B 检cha试ji盒标签上的有效qi。如果超过有效qi,qing勿使用。

C 按shuo明书que定所有试ji齐全(数量、体ji)。

D 标本制备要规范,每fen标本体ji要按2-3个复孔yi上的量制备(贮存),jin量分装做备fen。短qi内无法实验zhe,zhu意低温保存。

E 准备好所有实验e外所需物品,(bi如yi液器,试管,清xi器,酶标仪)。

F 按shuo明书jiang所用试ji平衡zhishi温,根ju检测标本数量que定所需试ji的量。

G 检cha试ji盒内每种试ji的贮存条jian,保证所有试ji均按照试ji盒内shuo明书推jian的条jian存储。

H 检cha不稳定或zhe变质的试ji溶液(bi如沉淀或变色)。有些试ji,bi如标准品稀释液或zhe检测稀释液,可能zaishe计时就含有沉淀物。所有试jizai滴入酶标板之前,必需充分hunyun。而由于沉淀物的特性,zai加入酶标板之前,必需不停jiaoban。

I 保证充分的孵育时间和温du。

J 莤ing鹗褂貌煌鷆hanpi号的试ji取dai现有试ji或hun合现有试ji。

K zaihun合或溶jie蛋白溶液时,避免pao沫chan生。

L zai实验开始之前,an排好实验流cheng。

M zai实验开始之前,清洁工zuo台。

N 若觴ing蕋i,应与我公司或daili商的技术支硓hi

da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**吸附检测试ji盒结果判duan:

1. 每个标准品的OD值jian去空白孔的OD值后zuo图,如she置复孔,则应取其平均值计算。yi标准品的浓du为heng坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可yiOD值为heng坐标,标准品的浓du为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推jian使用专业的曲线制zuo软jian,如curve expert 1.3或1.4,zai软jian界面既可根ju样品OD值,由标准曲线cha出xiang应的浓du,乘yi稀释倍数;亦可jiang样品的OD值dai入标准曲线的ni合方cheng式,计算出样品浓du,再乘yi稀释倍数,即为样品的实际浓du。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应shi当稀释后zhong测,计算浓du时应乘yi稀释倍数。

 特异性:

本试ji盒用于检测da鼠钙腔蛋白(CALU),经检测与其它xiang似物质无明显交叉fan应。

由于受到技术ji样本lai源的限制,不可能wan成dui所有xiang关或xiang似物质交叉fan应检测,因此本试ji盒有可能与未经检测的其它物质有交叉fan应。

hui收率:

穤hi鹩诙ㄖ笛錴i血浆样本中加入一定量的da鼠钙腔蛋白(CALU)(加标样品),zhong复测定并计算其均值,hui收率为测定值与li论值的bi率

线性:

zai定值血清ji血浆样本内加入shi量的da鼠钙腔蛋白(CALU),并倍眗en∈统赛span> 1:2,1:41:81:16 的待测样本,线性范围即为稀释后样本中da鼠钙腔蛋白(CALU)含量的测定值与li论值的bi率。


da鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**吸附检测试ji盒精密du:

精密du用样品测定值的变异系数 CV 表蔶inⅫ/span>CV(%) = SD/mean×100

pi内差:取同pi次试ji盒dui低、中、高值定值样本jin行定量检测,每fen样本连续测定 20 次,穤hi鸺扑悴煌╠u样本的平均值ji SD 值。

pi间差:选取 3 个不同pi次的试ji盒穤hi餯ui低、中、高值定值样本jin行定量测定,每个样本使用同一试ji盒zhong复

测定 8 次,穤hi鸺扑悴煌╠u样本的平均值ji SD 值。

pi内差: CV<10%

pi间差: CV<12%

稳定性:

经测定,试ji盒zai有效qi内按推jian温du保存,其huo性降低率小于 5%

为jian小外部因素dui试ji盒破坏前后检测值的影响,实验shi的环綾heng鮦ian需jin量保持一致,尤其是实验shi内温du、湿duji温育条jian。其次由同一实验员laijin行操zuo可jianshao萻ong蟛睢


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