荣yideng录zi料

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian免疫吸fu检测试剂盒

如果nindui该荣yideng耲ixing藂u的话,可yi
荣yideng录名称: 大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian免疫吸fu检测试剂盒
荣yideng录型号: αFP
荣yideng录展shang: ELISA试剂盒
荣yideng录文档: wu相guan文档

jiandan介绍

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大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian免疫吸fu检测试剂盒  的xiang蟜u樯埸/font>

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**吸fu检测试剂盒

使用说明书

yu期应用

本试剂簒ing擞盟賧ideng耲ixing命span>ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、组zhiyun浆、细胞裂解液、细胞pei养shang清液和其他生物液体中甲胎蛋白(αFP)含量。

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**吸fu检测试剂盒基本原理:

本试剂盒采用双荣yideng耲ixing腅LISA法。用kang大鼠甲胎蛋白(αFP)荣yideng录包被yu酶标banshang,实验shi样品或标准品中的大鼠甲胎蛋白(αFP)与包被荣yideng录结合,游离的成穤hi粁i去。依ci加入生物su化的kang大鼠甲胎蛋白(αFP)荣yideng录和辣根过yang化物酶标记的亲和su。kang大鼠甲胎蛋白(αFP)荣yideng录与结合在包被荣yideng录shang的大鼠甲胎蛋白(αFP)结簒i⑸飐u与亲和su特异xing结合而xing成**复合物,游离的成穤hi粁i去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过yang化物酶的cui化下cheng现蓝色,加终zhi液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,大鼠甲胎蛋白(αFP)浓du与OD450值zhi间cheng正比,通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠甲胎蛋白(αFP)的浓du。

描shu:

英文名称 Rat αFP (Alpha-Fetoprotein) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**吸fu测定试剂盒
货号 X-EL-R0153c 謟hi簏/span> Rat/大鼠
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双荣yideng耲ixing姆?/span>
检测fan围 0.313~20ng/mL 灵敏du 0.188ng/mL

组成:

謝ing拿劈/span>

英文名称

规格

保cun

  ELISA酶标ban(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&样品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物su化荣yideng录

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物su化荣yideng录xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP胒u岷衔铧/span>

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(bi光)

胒u岷衔飜i释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终zhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封ban覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

荣yideng录说明书

Product  Description

  1 

 

zhi检baogao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请及shi检查所觴ing锲肥欠衿肴暾?/span>
#: 
yi周内使用可cunyu4℃,需长shi间cunfang或多ci使用建议cunyu-20.                                      

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**吸fu检测试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

2. jiang浓缩xi祔ou河盟羲畑i释(1:25)。wei用完的fang回4℃。从冰箱中取出的浓缩xi祔ou嚎蒼eng有结晶,属yu正常现xiang,可用40℃水浴wei加热使结晶完全溶解后再pei制xi祔ou海尤任耫u瞙ui?0℃,使用shixi祔ou河ξ椅拢5比帐褂谩

3. 标准品: yu10000×g离心1分钟,加入标准品&样品xi释液1.0mL至冻干标准品中,xuan紧管盖,静置10分钟,shang下颠倒数ci,待其充分溶解后,用移液qijiang其轻轻混yun(浓du为20ng/mL)。ran后根据需要进xing倍比xi蕋ingㄗⅲ翰hui獄hi接在反应孔中进xing倍比xi蕋ing=ㄒ閜ei制成yi下浓du:按照xi释方法图例 标准品&样品xi释液zhi接作为空白孔0ng/mL。如pei制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的shangshu标准品加入含有0.5mL标准品&样品xi释液的EP管中,混yunji可,其余浓du依此类推。 

4. 生物su化荣yideng录工作液:实验前计算当ci实验所需用量(yi100μL/孔计),实jipei制shi应多pei制100-200μL。使用前15分钟,yi生物su化荣yideng录xi释液xi释浓缩生物su化荣yideng录(1:100)成工作浓du。当日使用。

5. 胒u岷衔锕ぷ饕海菏笛榍凹扑愕眂i实验所需用量(yi100μL/孔计),实jipei制shi应多pei制100-200μL。使用前15分钟,yi胒u岷衔飜i释液xi释浓缩HRP胒u岷衔?1:100)成工作浓du。

当日使用。

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**吸fu检测试剂盒标准品xi释方法图例:(yi500μL/管为例,ye可根据实ji用量来xi蕋ing?00μL/管)

1.使用前jiang所有的试剂和标本缓慢jun衡至室温(18-25oC),试剂不nengzhi接在37oC溶解。

2.标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品xi释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同shi反复颠倒/搓动yi助溶解,其浓du为20ng/mL。准备7gexi释标准品的EP管,每geEP管中加入500μL的标准品xi释液,如图所示依ci倍比xi蕋ing曜计穢i释液(0pg/mL)zhi接作为空白孔。为保证实验结果有xiaoxing,胟an问笛榍胧褂眯碌谋曜计啡芤骸

      

1. 在各孔中加入标准品或样品各100μL, 37℃fu育90分钟

2. 加入100μL 生物su化荣yideng录工作液,37℃fu育60分钟

3. xi涤3ci

4. 加入100μL胒u岷衔锕ぷ饕海?nbsp;37℃fu育30分钟

5. xi涤5ci

6. 加入90μL底物溶液, 37℃fu育15分钟左you

7. 加入50μL终zhi液,立ji在450nm波长处测量OD值

8. 结果计算

yi、操作因suduiELISA结果的影响ELISA操作步zhou复杂,操作不当jiang引起絰i蟮奈蟛睢i下叙shu各ge步zhou中的影响因su。

1.加样

2.温育

3.xi涤

4.显色

5.比色

二、hui区的设置通常情况下,ELISA定xing实验yi“阳xing”和“阴xing”来baogao结果,两者间有yitiao分界线被称为“阳xing判duan值”(cut-off value,CO值),zhe是定xing**测定结果baogao的依据。

三、标本复查ELISA蕑hiぜ觳夤谈丛樱跋煲騭ujiao多,ji使室内zhi控在控,ye可neng因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力du是保证结果准确xing的可靠方法,比如duiHBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳xing标本及少见模蔶iang募觳饨峁鴛ing复查。

四、结果判duan和baogao常用下列ji謟hi椒ū硎窘峁

1.定xing测定

2.半定量测定 结果yi般yi滴du表蔶in

3.定量测定 ji用已知量的标准品作yi系列xi释后进xingELISA测定,绘制标准曲线,结果yi优良量或dan位表蔶inT贓LISA定量检测中每yi块反应ban都必须绘制相应的标准曲线。

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**吸fu检测试剂盒会出现的问题及解决办法:

1. 加入反应终zhi液后,mei觴ing庵祷蛭庵祊ian低。

a.原因:wei加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步zhou进xing。

b.原因:试剂盒内容物weineng充分回。

解决办法:萬anㄊ约梁心谌菸锘匚潞笤俳鴛ing操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:ruo室温太低(<19℃),请yu操作步zhou4,shi当延长温育shi间。

d.原因:wei使用试剂盒的清xi液清xi。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的清xi液清xi。

e.原因:试剂盒已过有xiao期限。

解决办法:请更换成仍在有xiao期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线xing不佳,或是平xingxing不好。

a.原因:温育位置bi光不簃ei蚴艿狡鞲扇拧

解决办法: 请确认温育位置既不tou光ye不tou风(如抽屉内)。

b.原因:操作shi间拖太久。

解决办法:请在方法shu练后再进xing操作。

c.原因:wei孔间相互污萰in

解决办法: 加样品shi,请小心勿溅出wei孔外,yi免造成其tawei孔的污萰in

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量瞙ui恢隆

解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头zhi间有gaodu密合xing。

e.原因:添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂shi,吸头请勿接触wei孔。

f.原因:xiban过程发生问题(如管耭an氯i完ban后wei立刻进xing下yi步zhou)。

解决办法:请随shi监控xibanjixiban过程,xi完后立ji进xing下yi步zhou。

3. 吸光值junpiangao(或线xing不够陡)。

a.原因:室温太gao(>25℃)。

解决办法: ruowu法jiang低室内温du,请shi当缩duan步zhou4的温育shi间。

b.原因:底物溶液受到污萰in

解决办法: ruo发现底物溶液已cheng现淡蓝色,请瞙ui偈褂谩

c.原因:反应shi间超过太久。

解决办法:请控制反应shi间。

d.原因:酶标记物污染了盒内其ta试剂。

解决办法:使用过的吸头应立ji丢弃,可bi免试剂间相互污染,fan是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容qi应立ji清xi干净。(先yi漂白水浸pao,再yi清水冲xi干净,可确保wu残留)

4. 阴xing标准品的吸光值低yu阳xing标准品的吸光值。

a.原因:wei孔中的试剂weineng充分混簒i

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合junyun。

b.原因:xiban过程发生问题(同2-f.)。

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量瞙ui恢隆

解决办法: 请参考2-d.

注意事项:

A zi细阅du说明书。

B 检查试剂盒标签shang的有xiao期。如果超过有xiao期,请勿使用。

C 按说明书萬anㄋ惺约疗肴ㄊ俊⑻寤

D 标本制备要规fan,每份标本体积要按2-3ge复孔yishang的量制备(zhucun),jin量穤hong白霰阜荨uan期内wu法实验者,注意低温保cun。

E 准备好所有实验e外所需物品,(比如移液qi,试管,清xiqi,酶标仪)。

F 按说明书jiang所用试剂平衡至室温,根据检测标本数量萬anㄋ枋约恋牧俊

G 检查试剂盒内每謟hi约恋膠hucuntiao件,保证所有试剂jun按照试剂盒内说明书推荐的tiao件cun储。

H 检查不稳定或者变zhi的试剂溶液(比如沉dian或变色)。觴ing┦约li热绫曜计穢i释液或者检测xi释液,可neng在设计shi就含有沉dian物。所有试剂在滴入酶标banzhi前,必需充分混yun。而由yu沉dian物的特xing,在加入酶标banzhi前,必需不tingjiao拌。

I 保证充分的fu育shi间和温du。

J 莤ing鹗褂貌煌鷓i号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

K 在混合或溶解蛋白溶液shi,bi免pao沫产生。

L 在实验开shizhi前,安排好实验流程。

M 在实验开shizhi前,清洁工作tai。

N ruo觴ing侍猓τ胛夜净虼韘hang的jishuzhi持lian系

大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**吸fu检测试剂盒结果判duan:

1. 每ge标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置复孔,则应取其平jun值计算。yi标准品的浓du为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可yiOD值为横坐标,标准品的浓du为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作ruan件,如curve expert 1.3或1.4,在ruan件界面既可根据样品OD值,由标准曲线查出相应的浓du,chengyixi释倍数ui嗫蒵iang样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计算出样苀ang╠u,再chengyixi释倍数,ji为样品的实ji浓du。

3. ruo样品OD值gaoyu标准曲线shang限,应shi当xi释后重测,计算浓dushi应chengyixi释倍数。

 特异xing:

本试剂盒用yu检测大鼠甲胎蛋白(αFP),经检测与其ta相似物zhiwu明显jiaocha反应。

由yu受到jishu及样本来源的限制,不可neng完成dui所有相guan或相似物zhijiaocha反应检测,因此本试剂盒有可neng与wei经检测的其ta物zhi有jiaocha反应。

回收率:

穤hi饄u定值血清及血浆样本中加入yi定量的大鼠甲胎蛋白(αFP)(加标样品),重复测定并计算其jun值,回收率为测定值与理lun值的比率

线xing:

在定值血清及血浆样本内加入shi量的大鼠甲胎蛋白(αFP),并倍比xi释成 1:21:41:81:16 的待测样本,线xingfan围ji为xi释后样本中大鼠甲胎蛋白(αFP)含量的测定值与理lun值的比率。


大鼠甲胎蛋白(αFP)酶lian**吸fu检测试剂盒精密du:

精密du用样苀an舛ㄖ档谋湟煜凳?/span> CV 表蔶inⅫ/span>CV(%) = SD/mean×100

pi内差:取同pici试剂盒dui低、中、gao值定值样本进xing定量检测,每份样本连续测定 20 ci,穤hi鸺扑悴煌╠u样本的平jun值及 SD 值。

pi间差:xuan取 3 ge不同pici的试剂盒穤hi餯ui低、中、gao值定值样本进xing定量测定,每ge样本使用同yi试剂盒重复

测定 8 ci,穤hi鸺扑悴煌╠u样本的平jun值及 SD 值。

pi内差: CV<10%

pi间差: CV<12%

稳定xing:

经测定,试剂簒ing谟衳iao期内按推荐温du保cun,其活xingjiang低率小yu 5%

为减小外bu因sudui试剂盒po籨eng昂蠹觳庵档挠跋欤笛槭业幕肪硉iao件需jin量保持yi致,尤其是实验室内温du、湿du及温育tiao件。其ci由同yi实验员来进xing操作可减少萻ong蟛睢